鸡新城疫抗体检测技术在诊断中的应用

文│李媛（广西壮族自治区北海市动物疫病预防控制中心）

鸡新城疫（Newcastle Disease，以下简称ND）是副黏病毒引起的一种传染性疾病，病鸡以消化道和呼吸道症状为主，可导致病鸡死亡。此病无明显季节性特征，也没有年龄特征，四季均可发病，尤其是气候寒冷或者季节交替时节，任何阶段的鸡都可能发病，且死亡率较高。由于此病的感染性较强，一旦发病往往难以有效控制，从而导致鸡大面积死亡，因此日常的防疫和监测是关键。采用鸡新城疫抗体检测技术可以准确评估免疫抗体水平，从而判断鸡群对鸡新城疫的抵抗能力，及早预防（Newcastle Disease Virus，以下简称NDV）。

一、病例情况

2019年3月，某鸡场的鸡突然发病，病鸡主要症状为呼吸困难，发热，嗉囊积液，下痢，粪便为黄白色、绿色或者黄绿色，口角分泌酸臭液体，双腿麻痹，无法正常站立。该鸡场为50日龄肉鸡，存栏量2100只，常规免疫。发病后，该养鸡场采取了无害化处理措施，但仍有大量鸡只死亡，发病率超过85%，死亡1400余只，死亡率70%以上，经济损失严重。

二、剖检变化

病鸡喉头、气管出血，气管中有少量黏液；小肠前端、十二指肠以及盲肠扁桃体有点状或斑状出血，部分病鸡肠道溃疡，脾肿大有白色坏死点，肺、肝和肾无明显病变；病鸡体内多部位黏膜与浆膜出血，盲肠以及盲肠扁桃体肿胀出血，心冠脂肪以及心外膜点状出血。

三、鸡新城疫实验室诊断

1.细菌学检验。随机取病死鸡解剖，取心脏、肝和脾制作组织触片，分别做革兰氏染色和美蓝染色镜检，未见病原菌。采用上述病料分别接种血琼脂平板、普通琼脂平板和SS琼脂平板，置恒温箱37℃，培养24小时，无菌落，重复试验，发现仍无菌落，提示病原与细菌无关，考虑进行病毒分离试验。

2.病毒分离试验。无菌操作取病死鸡脾以及脑组织，碾碎研磨后经2次冻融，配置青霉素与链霉素含量为1000毫升的无菌生理盐水，按照1∶5的比例进行稀释，然后以4000转/分的速率离心处理15分钟，静置后取上清液，放置在冰箱中4～12小时，冰箱温度控制在4℃。

（1）鸡胚接种。选取11日龄SPE鸡胚30枚，将处理后的上清液经尿囊腔接种，每个鸡胚接种0.2毫升，然后采用石蜡进行封存并继续孵化，24小时内若鸡胚死亡则予以剔除，此后每间隔2～4小时照蛋1次，死亡的鸡胚放置在冰箱中备用，冰箱温度控制在4℃。

（2）病毒鉴定。病毒血凝试验：收获新鲜感染鸡胚尿囊液进行血凝试验，以微量法在血凝板上进行2倍比稀释，同时设置生理盐水作为对照孔，每孔加入1%鸡红细胞并振荡均匀，静置20℃环境下40分钟，观察试验结果。对照孔鸡红细胞呈纽扣状沉底，病毒有凝集性，表明该病毒有血凝性特征。抗NDV阳性血清血凝抑制试验，操作如上，试验结果如表1所示。前4孔有凝集现象，因ND阳性血清的效价较低、病毒浓度偏高所致；第3孔往后病毒对鸡红细胞的凝集作用完全被ND阳性血清抑制。试验表明，从病死鸡身上提取的脾以及脑组织分离出的病毒，对鸡红细胞具有凝集作用，而凝集作用可以完全被ND阳性血清抑制，表明该病毒与NDV存在相关性。

表1 抗NDV阳性血清血凝抑制试验结果

（3）抗体检测。对鸡进行ND抗体检测，运用血凝和血凝抑制试验（GB/T16550-2020），检测抗体是否异常升高，结合临床症状、剖检变化和病毒分离鉴定，综合诊断为ND感染。对该鸡场按不少于10%的比例随机抽取30只鸡做ND抗体检测，结果为其中26只鸡ND抗体高于11log2，抗体水平异常升高，结合临床症状、剖检变化和病毒分离鉴定，提示该鸡场的鸡可能感染新城疫强毒。

四、鸡新城疫抗体检测技术应用

1.雏鸡首免。雏鸡体内母源抗体在接近消失或者刚消失时进行首次免疫，可以取得良好的效果。一般情况下，雏鸡出壳1天后即采集雏鸡血液，测试雏鸡HI效价，在中、大型鸡场，采用抽样测试的方式，抽样率不得小于0.1%；否则，不具备参考价值。若是小型鸡场，则抽样率不低于2%；否则，不具备参考价值。抽样测试后计算鸡群的平均HI效价，然后根据计算公式得出雏鸡首免日龄，计算公式如下：首免日龄＝4.5×（1日龄鸡群平均HI效价－4）＋5。该养殖场经抽样测试后得出的鸡群HI平均效价是7.5log2，则雏鸡首免日龄即为4.5×（6.5－4）＋5＝11.75日龄，即在雏鸡12日龄进行首次免疫接种可以获得最好的免疫效果。

2.定期抽检。雏鸡进行首次免疫接种后，需要定期对其进行抽检，评估免疫效果，若免疫抗体滴度70%以上达到5log2及以上，说明免疫效果良好，正常饲养即可；若免疫抗体滴度下降或者无效，要及时进行二次免疫接种。一般在首次免疫接种后15～20天采血抽检。对于大中型鸡场，抽样率不得小于0.1%；否则不具备参考价值。小型鸡养殖场则需要增加抽样率，建议不低于2%；否则，不具备参考价值。抽检后，按照上述公式计算鸡群HI抗体平均效价，如果平均值低于4log2，则需要对鸡群进行二次免疫接种；若平均值在4log2以上，则正常饲养。首次免疫接种后第15～20天再次进行采血抽检，并计算鸡群HI抗体平均效价，如果平均值低于5log2，则需要对鸡群进行二次免疫接种，若平均值在5log2以上，则正常饲养。此后可延长抽检间隔时间，需要注意的是同日龄种鸡的HI抗体效价要高于其他鸡至少1log2，若低于1log2，则认为免疫失败，需要再次进行免疫接种。

3.其他情况。若鸡场不具备进行ND抗体检测的条件，则可以尝试提高免疫接种质量与密度，使鸡群保持持续、稳定的抗体，一般7～10日龄的雏鸡可以选择IV系或者NDII系疫苗进行首次免疫接种；20～25日龄鸡群可以选择II系疫苗进行免疫接种，同时肌内注射或者皮下注射规格为0.3毫升/只的ND油乳剂灭活苗；60日龄鸡群建议选择联苗或者弱毒苗接种；120日龄鸡群建议选择联苗或者油苗接种；10月龄以上的种鸡群除首次免疫接种外，还需要进行1次油苗接种。通过上述方式能取得良好的免疫效果，降低鸡群发病风险。

综上所述，在新城疫抗体技术检测过程中，需要严格按照规定进行操作，鸡新城疫会严重影响养殖业发展，需要做好实验室诊断，并且在诊断过程中应用好抗体检测技术，有效降低发病率，促进养殖业发展。