胶质瘤细胞外泌体通过miR-125b对细胞增殖凋亡的影响

刘彦廷，孙 拯，王壮壮，龚 伟，马金阳，田春雷

胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤之一，目前临床上多采用手术+放化疗等综合治疗为主，但患者复发率极高，整体预后差。胶质瘤细胞可分泌一种直径约40～100 nm细胞外膜性囊泡，即外泌体，不仅可作为细胞间的通信载体，还可通过携带miRNAs调控肿瘤细胞的增殖凋亡。目前发现，miR-125b与胶质瘤组织恶性程度存在相关性，可通过抑制下游靶基因，调控胶质瘤细胞的增殖凋亡。如：miR-125b可通过抑制DNA损伤DRAM2、P53和P38等靶基因，改变肿瘤细胞的增殖活性。该研究拟通过提取胶质瘤细胞的外泌体，将其与U251细胞共培养，观察外泌体能否通过miRNAs调控胶质瘤细胞增殖凋亡，为该领域的研究提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

人胶质瘤细胞U251与人星型胶质细胞购于南方医科大学神经病学研究实验室细胞库，RT-PCR试剂盒购于日本TaKaRa公司，CCK-8试剂盒购于美国Sigma公司；兔抗人CD63、CD9和phalloidin单克隆抗体均购于美国Cell Signaling Technolog公司，β-actin单克隆抗体购于上海康成生物公司；胎牛血清、培养基购于美国Gibco公司；PKH67购于德国默克公司，Annexin-V/ Propidium Iodide试剂盒购自广州康众生物有限公司，RPMI1640和胎牛血清购自广州益龙科技有限公司。共聚焦显微镜(德国莱卡公司)，H-7600电子显微镜(日本日立)。2%磷钨酸购自美国Sigma，TRIzol LS试剂(Invitrogen，CA，USA)。

1.2 细胞培养与外泌体的提取

人源性胶质瘤细胞U251或人星型胶质细胞置于RPMI 1640 培养基中常规培养，添加青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml降低细胞污染，设定培养箱参数为37 ℃、95%饱和湿度，5% CO培养箱，每2～3天更换1次培养基，常规培……