miR-181a通过调控Smad7对COPD大鼠气道重塑的作用研究

王雅杰，王 嘉，岳洪娟，窦亚平，李 娜

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是常见的慢性呼吸系统疾病，发病率高、致死率高，严重威胁人类健康。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，其异常表达与多种疾病密切相关。研究发现COPD患者肺组织多种miRNA上调，可能影响缺氧诱导因子-1α相关的肺结构修复程序，与COPD发病机制有关。母亲信号蛋白同源物(mothers against decapentaplegic homolog，Smad)蛋白家族是转化生长因子β家族(transforming growth factor-βs，TGF-βs)的重要底物，分为受体激活型、通用型和抑制型三种，Smad7是抑制型Smad，可以选择性抑制TGF-βs信号通路。研究发现COPD患者肺组织Smad7表达下调，且与气道壁厚度、气道平滑肌厚度呈负相关。miR-181a在COPD中是否通过调控Smad7发挥作用，尚不清楚，该研究通过建立COPD大鼠模型，探讨miR-181a是否通过调控Smad7对COPD大鼠气道重塑发挥作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

实验动物 清洁级SD雄性大鼠80只，8周龄，体质量200～250 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物生产许可证号：SCXK(沪)2017-0005。大鼠购入后于清洁通风环境中适应性饲养7 d，温度20～26 ℃，湿度40%～60%，明暗周期12 h/12 h循环。

1.1.2

主要试剂与仪器 miR-181a mimics、miR-181a inhibitors、control mimics(广州市锐博生物科技有限公司)，脂多糖(北京索莱宝公司，批号：224R032)，大前门牌香烟(上海烟草公司)，兔抗大鼠基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase，MMP-9)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)单克隆抗体、兔抗大鼠Smad7、p-Smad7多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(美国Abcam公司)，ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司)，SA-ALC-V8S小动物呼吸机(北京中西华大科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1

建模与分组 80只大鼠随机取65只参考黄文锋 等的方法建立COPD大鼠模型，分别于第1、15 天气管内注入200 μl脂多糖溶液(1 g/L)，并且于第2～28天(除第15天)将大鼠置于留有两个通气孔的72 L玻璃箱中被动吸烟，每次30 min，每天2次，间隔8 h，每天12支烟。……