邢江浩,郝吉庆
骨肉瘤是一种高度恶性的骨肿瘤,较多发生于20岁以下的年轻人或者儿童。骨肉瘤因其低存活率而广为人知,患者的5年生存率仅有20%。与骨肉瘤相关的病死率较高。当前的骨肉瘤治疗策略主要包括化学疗法和外科手术。然而,治疗后患者面临的最大问题仍是肿瘤的持续生长;研究显示,血管生成是骨肉瘤生长和转移的关键环节,肿瘤中血管网络的生成是骨肉瘤增长的关键因素。外泌体是几乎所有细胞均会释放的细胞外囊泡。它们可以将内容物(如microRNA、lncRNA、蛋白质和mRNA)传输到受体细胞,从而参与细胞间的各种通讯。肿瘤来源的外泌体已显示在肿瘤生长的不同时期中发挥作用,但目前对其中的机制研究较少。miR-301a-3p是近年发现的一种致癌miRNA,虽然目前已有文献报道其在多种恶性肿瘤,如胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌及结直肠癌中高表达,参与肿瘤的发生、发展,并且文献报道其高表达与患者的不良预后密切相关。目前尚未有研究其对于骨肉瘤发生发展的作用,该研究拟阐明在骨肉瘤的生长过程中,其来源的外泌体内包含的miRNA的作用及可能存在的潜在机制。
1.1 材料
1.1.1
细胞培养 人骨肉瘤细胞株U2-OS和人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)购自中国科学院上海细胞库,U2-OS细胞用McCoy′5A培养基培养,HUVEC细胞用ECM培养基培养,两种培养基均加入有10%的胎牛血清配置,置于 37 ℃、5% CO培养箱中培养。1.1.2
主要试剂与仪器 McCoy′5A培养基购自上海中乔新舟生物科技公司;胎牛血清购自美国Gibco公司;……