抑制芳香烃受体表达促进人脐带间充质干细胞的增殖和软骨分化

王新伟，赵英杰，李素素，王越业，贾成艳，常 艳，魏 伟

人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)可以从婴儿脐带组织中获得，具有良好的多向分化潜能，相较于其他来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成软骨分化能力更强，并且脐带组织临床上取材方便，所以hUC-MSCs目前被广泛用于软骨组织工程中。芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)属于Per-Arnt-Sim同源域家族成员蛋白，是一种配体激活的核转录因子，可被污染物、微生物、食物和新陈代谢等提供的小分子活化。AhR参与许多重要的生物学过程，如细胞迁移和细胞分化并影响骨骼发育。已有研究表明AhR参与调控MSCs的成脂和成骨分化能力，但对其成软骨分化能力的影响还不清楚。基于以上研究背景，该研究使用小干扰RNA方法抑制hUC-MSCs中AhR的表达，观察AhR敲低后hUC-MSCs增殖以及成软骨分化能力的变化。

1 材料与方法

1.1 材料

hUC-MSCs由南京康雅生物科技有限公司提供；DMEM-F12培养基和软骨分化诱导培养基购自以色列BI公司；胎牛血清购自澳大利亚Science Cell公司；AhR-homo-1432 inhibitor 转染试剂、Lipofectamine2000及Opti-MEM购自上海吉凯基因生物科技有限公司；实时荧光定量PCR试剂盒和引物分别购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司和上海生工生物股份有限公司；SOX-9和COL2A1抗体购自美国Santa Cruz公司；CCK-8检测试剂盒购自合肥鼎秀生物科技有限公司；阿利新蓝染色试剂购自武汉赛维尔生物科技有限公司；CD34、CD45、CD73和CD105流式抗体购自美国BioLegend公司；BCA蛋白含量检测试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司。

1.2 主要仪器

Tecan Infinite M 1000 PRO酶标仪(瑞士Tecan)；Olympus显微成像系统(日本Olympus)；FC 500型贝克曼流式细胞仪(美国Beckman Coulter)；7500荧光定量PCR仪(美国Thermo Fisher Scientific)；……