自组装DEAC-PNAG@miR-150纳米体系制备及其血管保护机制研究

李雅珺,许 航,任 珊

脓毒症是重症监护病房高死亡率的主要原因之一。脓毒症可释放大量炎症因子，促进免疫细胞的活化和转运。此外，脓毒症常因内皮功能障碍扰乱微循环，导致器官衰竭。因此，减少脓毒症患者体内相关炎症因子的释放、减轻内皮细胞损伤对于降低脓毒症患者的死亡率大有裨益。微小RNA(mircoRNA,miRNA)能预防和修复脓毒症患者体内细胞压力和炎症引起的内皮细胞损伤。miR-150是内皮细胞中表达的miRNA，对维持血管完整性和血管生成具有重要意义。核酸的一些理化性质限制其细胞摄取和潜在治疗效果。因此，开发一种安全有效的miRNA载体对miRNA的治疗具有重要意义。该研究通自组装技术制备脱乙酰化聚N-乙酰氨基葡萄糖(DEAC-PNAG)-miRNAs纳米聚合物并对其进行表征，检测纳米聚合物对miRNAs保护和靶向作用，并探讨其发挥血管保护作用的相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

脱乙酰聚N-乙酰氨基葡萄糖(DEAC-PNAG)40 mg/ml(分子量约40 000)和无菌NaSO(50 mmol/L)购自阿拉丁公司(中国)；EBM-2基础培养基，胎牛血清(FBS)、细胞培养基、青霉素链霉素溶液购自Sigma Aldrich(美国)；miR-150-5p(UCUCCCAACCCUUGUACCAGUG)、miR-150-5p抑制剂从Genechem(中国)获得；标记为hsa-miR-150-5p的Cy3购买自GE Healthcare Dharmacon(美国)；含DAPI的ExtendGold防褪色试剂(ThermoFisher Scientific，美国)；RT-PCR试剂盒购自Qiagen公司(美国)；人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)购自BioVector公司(中国)；NIH3T3胚胎成纤维细胞购自Solarbio公司(美国)。

1.2 仪器与设备

5424R离心机(Eppendorf,德国)； JEOL-1010透射电子显微镜(美国);滨松C4742-95数码相机(日本)；Zetasizer Nano-ZS 90(Malvern，英国)；UVP透照仪(Alpha Innotech Corporation，日本)；Synergy 4微板阅读器(BioTek，美国)；Olympus IX73倒置显微镜(Olympus，日本)；CFX96实时PCR检测系统(Bio-Rad，美国)。

1.3 纳米颗粒制备

在室温下向100 μl 浓度为50 mmol/L NaSO溶液中加入miR-150-5p(0.5～25.0 μg)，以研究封装效率。……