LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

王小蝶，余维丽，王福贵，孙 昀

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是胰腺的炎症性疾病，严重时可引起全身炎症反应综合征，可导致单个或多个器官功能障碍，甚至死亡。AP的特征是蛋白酶异常激活、实质损伤、胰腺自身消化、胰腺腺泡细胞凋亡和坏死以及强烈的炎症反应。目前AP的治疗方法有液体复苏、营养支持等，尚无针对性药物治疗。而长链非编码 RNA( long non-coding RNA, LncRNA)是由200多个核苷酸组成，参与调节了许多细胞过程，如细胞凋亡、增殖、自噬等。许多研究已发现LncRNAs参与了多种生物学和病理过程。LncRNA H19是位于染色体11P15.5上的母系表达印记基因转录而来，并在某些疾病中发现了H19的上调，例如肝癌、食管癌、动脉粥样硬化、骨关节炎等。然而，LncRNA H19是否可以通过调节胰腺腺泡细胞凋亡从而参与AP的发生发展尚不清楚。该研究拟探讨LncRNA H19在大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡中的作用机制，以期为AP的发病机制以及临床诊疗提供理论依据和思路。

1 材料与方法

1.1 主要材料

大鼠胰腺腺泡细胞AR42J购于上海富衡细胞库。LncRNA H19的siRNA(si-H19)，siRNA对照(si-NC)，空载质粒对照(pEX-3)以及过表达H19(pEX-3-H19)序列均购于上海吉玛制药技术有限公司。Lipofectamine 2000购于美国Life Technology公司；Opti-MEM(x1)培养基购于美国Gibco公司。雨蛙素粉末购于北京索莱宝科技有限公司；qRT-PCR试剂盒购于日本Takara公司。Caspase 3、Caspase 9以及β-Actin抗体均购于武汉三鹰生物技术有限公司。Annexin-FITC/PI细胞凋亡试剂盒购于上海七海复泰生物科技有限公司。

1.2 细胞培养与转染

AR42J细胞使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基，置于37℃、5%CO恒温培养箱中，每2～3 d传代1次。取对数生长期细胞接种至6孔板，待细胞长至60%～80%汇合度后，根据Lip2000说明书进行转染，转染成功后用雨蛙素(100 nmol/L)刺激24 h，处理好的细胞进行后续实验。……