MTAN用于抑制血链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌混合菌的体外研究

周 琳，蔡文静，杨 慧，吴梦楠，郑营雪

自然界多数细菌以生物膜的形成存在，该存在形式对宿主的致病性明显高于单种细菌。因为细菌生物膜能够降低宿主免疫系统的敏感性，增强细胞毒力和对抗生素的耐受性。该研究中的Nisin是由乳酸链球菌产生的具有34个氨基酸的小分子抗菌肽，有抗菌性、低毒、生物相容性，难以使细菌产生耐药性等多种优异性能。并且，Nisin易被分解成氨基酸，不会污染环境。因此，被广泛用于食品抗菌防腐保鲜领域。MTAD(多西霉素、柠檬酸、吐温-80混合物)中多西环素使细菌产生耐药性以及生物安全性不高的特点使其抗菌性受到影响，通过将MTAD中的多西环素换成Nisin，形成新的混合物MTAN，提高抗菌性以及生物安全性。Nisin的诸多优点，使MTAN成为一个很有前途的抗菌新药。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

牙龈卟啉单胞菌(BNCC337441)、具核梭杆菌(BNCC337608)、血链球菌(BNCC134927)均来自北京北纳创联生物技术研究院；Nisin(北京索莱宝科技有限公司)，柠檬酸(天津市瑞金特化学品有限公司)，乙二胺四乙酸(EDTA，北京索莱宝科技有限公司)。Lambda35分光光度计(美国珀金埃尔默有限公司)，Blue pard 37 ℃恒温箱(上海一恒科学仪器有限公司)，2.5 L厌氧产气袋(日本三菱瓦斯化学株式会社)。

1.2 方法

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MTAN溶液的配制 每10 ml MTAN标准液由0.3 g Nisin粉、0.425 g柠檬酸粉、0.05 ml吐温-80和9.95 ml无菌水(由三蒸水在121℃，20 min高温高压蒸汽灭菌而得)配制而成。

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混合菌液的制备 血链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌分别复苏活化增菌计数稀释。将3种菌悬液各取150 μl×2两菌种混匀，再各取100 μl×1三菌种混匀，制成混合菌悬液4种。……