I-tip法在海绵微生物分离培养中的应用与改进

张乙宸 张嘉凯 张桓耀 张亦弛 郝正琦

关键词：海洋动物微生物;分离;培养;I-tip技术

一、海洋动物——海绵

海洋动物有很多，其中研究比较广泛的是海绵。海绵是一种笼统的称呼，作为一种原始的多细胞动物很早便在地球上存在。淡水产和海产的海绵均存在，多数以固定落着的方式生长。海洋动物来源微生物的分离一般是采用平板分离法。平板分离法存在一定的局限性，对于这种方法，无法完美地对菌落进行分离，而且具有较高的被污染的风险。

二、两相共流法

用注射器或其他挤压设备将聚合物溶液滴入交联剂中，经固化交联形成具有一定机械强度的、稳定的水凝胶微球的方法称为锐孔法（或挤出法）。

两相共流法（Coflowing liquid stream method）：液滴形成装置的主要部件是一个直径几百微米的用于挤出悬浮细胞的海藻酸钠水溶液的针和一个直径2.5毫米的海藻酸钠管，通过这个管，挤出的溶液流人周围不相容的液体石蜡中。针被放置在同轴小管附近的上游。黏性海藻酸钠水溶液的液滴直径可以通过改变内部和外部流体的速度以及针的直径来控制，从几十微米到几百微米不等。利用300μm直径的针头，将细胞悬浮的海藻酸钠溶液以1.2cm/s的速度挤压到环境液体石蜡中，得到直径为48±8μm的cho-kl细胞包裹液滴。分裂过程不影响封闭细胞的生存能力，因为封闭过程后超过95%的cho-kl细胞仍然存活。

以上为分散相口与微球制备装置，该装置主要由毛细玻璃管（4）、针头（8）、缓冲池（5）、固定器（6）、恒流泵（2）、微量注射泵（1）等部分组成。……