敲低Ro60/SSA表达对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响

刘 丹，梁 平，陈嘉欣，刘月圆，刘冰熔

郑州大学第一附属医院消化内科 郑州 450052

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，发病率仅低于胃癌和食管癌，病死率居高不下，成为肿瘤临床研究的热点[1]。肝内转移以及肺转移是影响肝癌预后的重要因素，也是临床研究中亟待解决的难题[2]。Ro60/SSA抗原是干燥综合征和系统性红斑狼疮的免疫反应靶标[3-4]。以往的研究[5]表明，大约30%的癌症患者可检测到循环抗核抗体以及多种抗可提取性核抗原抗体，如Ro60/SSA。前期工作中，我们发现Ro60/SSA参与了胰腺癌肿瘤微环境的形成及其发生发展[6]。本研究中，我们利用siRNA技术敲低人肝癌细胞HAK-1A和HepG2中Ro60/SSA的表达，观察细胞转移和侵袭能力的变化，并通过移植瘤动物模型验证敲低Ro60/SSA对肝癌细胞成瘤能力的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞、实验动物与主要试剂HAK-1A和HepG2细胞由军事医学科学院刘继来博士赠予。siRNA-Ro60/SSA(5’-GGGCUGGAAAGAAGUUCAU TT-3’)和阴性对照siRNA-NC(5’-UUCUC CGAACGUGUCACGUTT-3’) 由上海吉玛制药技术有限公司合成。Ro60/SSA和GAPDH抗体分别购自美国Abcam公司和Cell Signaling 公司。转染试剂Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司。6周龄雌性BALB/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物机构认可证书注册号为CNAS LA0004。

1.2 敲低Ro60/SSA表达对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响

1.2.1实验分组 取对数生长期的HAK-1A和HepG2细胞分别接种于10 cm培养皿中，5×105个/皿。分3组处理：空白对照组常规培养(DMEM培养基+体积分数10%胎牛血清)；另两组分别转染siRNA-NC和siRNA-Ro60/SSA，转染过程参照Lipofectamine2000试剂盒说明操作。每组设置3个复孔，转染48 h后进行指标检测。

1.2.2细胞中Ro60/SSA表达的Western blot法检测 分别收集3组HAK-1A和HepG2细胞，应用裂解液RIPA裂解细胞并提取总蛋白，BCA法测蛋白浓度，然后行SDS-PAGE，每孔上样蛋白30 μg。……