蔡明博,金玉茜,徐苏龙,朱鹏飞,郭瑞霞
1)郑州大学第一附属医院妇科 郑州 450052 2)郑州大学第三附属医院盆底重建科 郑州 450052 3)郑州大学第一附属医院肝胆胰外科 郑州 450052
宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,在很多发展中国家,即使给予标准治疗,宫颈癌患者的5 a生存率仍不足50%[1]。因此探索宫颈癌发病机制,寻找宫颈癌治疗新靶点,具有重要意义。伴侣蛋白携带t复合多肽1-亚基3(chaperonin containing tailless complex polypeptide 1-subunit 3,CCT3)定位于人1号染色体上[2]。CCT3作为伴侣蛋白复合体的一个重要亚基,在肝癌[3]、乳腺癌[4]、甲状腺癌[5]、胃癌[6]等多种恶性肿瘤中高表达,且与恶性肿瘤的发生、进展及预后密切相关。本研究检测了CCT3在宫颈鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达,同时观察了抑制宫颈癌Hela细胞中CCT3表达对细胞增殖、迁移能力的影响,为宫颈癌靶向CCT3治疗提供实验依据。
1.1 宫颈组织标本获取收集2020年1~8月郑州大学第一附属医院妇科手术切除的宫颈鳞癌及癌旁正常组织标本共10对,患者年龄为35~65岁,临床分期为ⅠB期7例、ⅡA1期3例,术前均未接受任何治疗,标本均经病理证实。研究获得该院伦理委员会批准。组织标本获取后立即放入液氮中,然后转于-80 ℃冰箱中保存备用。
1.2 Hela细胞培养及分组Hela细胞购于中国科学院细胞库,常规在含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640、37 ℃、体积分数5% CO2及饱和湿度的条件下培养,2.5 g/L胰蛋白酶及0.2 g/L EDTA消化传代。取对数生长期细胞接种于6孔板中,每孔约5×104个细胞,培养至融合度达到50%左右时进行转染。将细胞分为空白对照组(正常培养)、阴性对照组(NC组,转染阴性对照shRNA)和干扰组(转染CCT3特异性shRNA)。……