柴胡皂苷A上调HO-1对新生大鼠神经OGD/R损伤的影响

何 静，王珏岚，邹福兰，梁小明，陈 燕

1)四川省医学科学院；四川省人民医院儿科 成都 610031 2)四川省医学科学院；四川省人民医院肿瘤科 成都 610031 3)四川省医学科学院；四川省人民医院门诊儿科 成都 610031

缺血缺氧性脑病是新生儿死亡和不可逆脑损伤的主要病因[1]。低温治疗等干预手段已大大改善了缺血缺氧性脑病新生儿的结局，但是，仍有大量新生儿死亡或遭受严重的脑损伤。缺血/缺氧和再灌注/复氧会引发自由基的产生，包括活性氧(reactive oxygen species，ROS)、过氧化氢和其他羟基自由基[2]，而自由基引起的炎症和氧化应激反应可导致神经细胞坏死和凋亡[3]。柴胡皂苷A(saikosaponin A，SSa)可以通过抑制核因子κB等抑制炎症和氧化应激反应[4]。SSa也可浓度依赖地上调核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid derived 2-like 2,Nrf2)和其靶分子血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)，缓解小鼠子宫内膜癌症状[5]。本研究中，我们分离了新生大鼠海马神经细胞建立体外氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)模型，观察SSa对海马神经细胞氧化应激及凋亡相关蛋白表达的影响，以探索SSa在脑缺血缺氧损伤中的作用。

1 材料与方法

1.1 细胞培养新生SD大鼠(出生2 d内，由四川省实验动物研究所实验动物中心提供)断头，分离海马神经细胞，在2.5 g/L胰蛋白酶(美国Sigma公司)中于37 ℃轻轻摇动消化20 min。将细胞悬浮于DMEM培养基(美国HyClone公司)中，该培养基含有体积分数10%胎牛血清、体积分数10%马血清、10 g/L L-谷氨酰胺(均购自美国Gibco公司)和100 U/mL青霉素、100 mg/L链霉素(美国HyClone公司)。细胞接种在15 mm共聚焦皿上，每皿5×105个，该皿用0.1 g/L聚D-赖氨酸(美国Sigma公司)包被。2 h后，用含有体积分数2%神经细胞培养补充剂B27(美国Gibco公司)、100 U/mL青霉素、100 mg/L链霉素和2.5 g/L谷氨酰胺的神经基础培养基代替共聚焦皿的培养基。……