下调Drp1对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡、氧化应激及炎症因子表达的影响

李曾一，王 松，高 宛，林玉玲

1)南阳市中心医院内分泌科 河南南阳 473000 2)郑州大学第一附属医院泌尿外科 郑州 450052

糖尿病肾病是一种临床上常见的糖尿病并发症，遗传学因素、氧化应激等是诱发糖尿病肾病的主要因素[1]。有研究[2]表明，肾小管上皮细胞损伤是糖尿病肾病进展的关键，高血糖能够诱导肾小管上皮细胞凋亡，促进细胞氧化损伤，进而造成肾小管组织功能异常。线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)是一种与线粒体分裂相关的蛋白，在人类新生儿发育中具有重要作用[3-4]。有研究[5-6]显示，糖尿病肾病中Drp1表达水平异常升高，Drp1参与阿德福韦诱发的肾小管上皮细胞功能损伤。本次实验以肾小管上皮细胞HK-2为研究对象，探讨Drp1在高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料HK-2细胞购自美国ATCC公司。丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)含量检测试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)含量检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所，炎性小体NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)抗体、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)检测试剂盒购自上海一研生物科技有限公司，Drp1抗体购自美国Abcam公司，活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)抗体购自美国CTS公司，SYBR Green PCR试剂盒购自德国QIAGEN公司，Trizol试剂购自上海将来实业股份有限公司，Drp1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒由山东解螺旋生物科技有限公司构建。

1.2 高糖对肾小管上皮细胞中Drp1表达的影响HK-2细胞分别培养于葡萄糖浓度为5.5、30.0 mmol/L的培养液中，记为正常对照组、高糖组，培养24 h后使用Real-time PCR和Western blot法检测细胞中Drp1 mRNA和蛋白的表达水平。……