杜记涛,曹 建,赵 稳,万相斌,李 智
(郑州大学附属肿瘤医院普外科,河南 郑州 450003)
结肠癌(colon cancer,CC)是最常见和最具侵袭性的恶性肿瘤之一,占全世界癌症死亡率第二位[1]。环境和遗传因素被认为是影响CC发病的主要因素,从治疗效果来看,个体差异性比较明显[2]。
近年来越来越多的长链非编码RNA(long non coding RNA,LncRNA)被发现与恶性肿瘤的各种生物学行为密切相关[3]。LINC00339是一种新近发现的LncRNA,在许多恶性肿瘤中异常表达[4]。例如,研究发现LINC00339在胃癌组织中表达增加,促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭[5]。但是LINC00339在CC中的作用机制尚未完全明确,这也是本研究重点关注的问题。
研究表明,在肿瘤组织中microRNAs(miRNAs)的表达与肿瘤的侵袭、转移、预后和耐药性等有关[6]。miRNAs在CC中的差异表达受到了广泛的关注。miR-873-5p已被证实在包括CC在内等多种肿瘤中异常表达[7-8]。过表达miR-873-5p可抑制CC细胞的增殖、集落形成和侵袭[9]。软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP),是一种由多种细胞表达的可溶性五聚糖蛋白,以往有研究表明,COMP高表达能够促进CC细胞增殖、集落形成、抗凋亡能力和肿瘤生长[10]。
本研究借助靶向关系预测网站发现了miR-873-5p和LINC00339和COMP之间的靶向关系,并且设计了一系列实验探讨LINC00339/miR-873-5p/COMP轴在CC发生发展中的作用。希望为对CC的诊断和治疗提供新的依据。
1.1 材料与试剂CC细胞系(RKO、HCT-116、HCT-8、SW620)和人正常肠上皮细胞系HIEC细胞均购自美国ATCC细胞库;DMEM培养基(90113)、逆转录试剂盒(T2240)和细胞裂解液(R010)购自北京索莱宝生物科技有限公司;LipofectamineTM3000试剂盒(L3000015)、荧光原位杂交试剂盒(QVT0519)、CCK-8试剂盒(PA5-32348)和Annexin-V-FITC/PI试剂盒(V13242)购自Thermo Fisher Scientific;双荧光素酶报告基因检测试剂盒(ab228530)来自Abcam;……