5/7型猪细小病毒双重PCR检测方法的建立

王茂鹏，王伟伟，李 笨，李乐天，鲁会军，金宁一，韩 硕，米志强，李 昌*

(1.温州大学 病毒学研究所，浙江 温州 325035；2.军事科学院 军事医学研究院 军事兽医研究所 中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元，吉林 长春 130122；3.辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳 110031；4.军事科学院 军事医学研究院 微生物流行病研究所，北京100071)

猪细小病毒(porcine parvoviruses,PPV)为细小病毒科细小病毒属成员，可引起母猪木乃伊胎、不孕不育及死胎等繁殖障碍性疾病，在世界各地的猪群中均有发现，是造成全球养猪业经济损失的重要传染病之一[1-5]。近年来，已发现7个基因型PPV(1～7)，通常用于区分猪细小病毒亚科成员，而这7个基因型PPV根据NS1蛋白序列同源性在细小病毒系统发育树上又被划分为Protoparvovirus、Tetraparvovirus、Chapparvovirus和Copiparvovirus4个不同的属[5-7]。

PPV5和PPV7分别属于Copiparvovirus属和Chapparvovirus属，于2013和2016年才被相继发现。XIAO等[4]对美国不同年龄段猪群感染PPV5进行的流行病学调查结果显示，其阳性率达6.6%，略高于PPV4发病率(4.1%)。除美国外，在中国、波兰和墨西哥等国家也陆续检出PPV5，PPV5常与PPV4及猪圆环病毒发生共感染，在肺组织内有较高的检出率，可造成严重的仔猪断奶后多系统衰弱综合征(post-weaning multi-systemic wasting syndrome,PMWS)[3,8-11]。PPV7亚型细小病毒已经在我国东北三省、广西省、安徽省等多地检出。现有文献表明，PPV5和PPV7共感染加重猪只病情[12-14]，但由于这2个亚型发现时间较短，对共感染病例的检测尚缺乏有效方法，本研究建立一种针对PPV5/PPV7的双重PCR检测方法，并对其进行优化，以期为深入了解PPV共感染对宿主状态的影响储备关键技术。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器E.coliDH5α感受态细胞、pBM16A载体购自博迈德生物有限公司；……