兔颈动脉血流灌注减少促进血管内皮细胞炎性反应

生 燕，李秀毛，郭 欣，谢 仟，黄仁杰，生 欣

(遵义医科大学 基础医学院 1.形态学实验室； 3.生物化学教研室，贵州 遵义 563000;2.遵义医科大学附属医院 胸心外科， 贵州 遵义 563000)

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性炎性疾病，炎性反应在其发生、发展过程中发挥重要作用[1]。大量研究显示血流灌注减少导致的血液流速降低能够重排内皮细胞骨架进而诱发内皮细胞炎性反应[2-3]。然而，其调控机制还不清楚。平面细胞极性信号通路是调节细胞极性的重要通路[4]，不仅与内皮细胞的炎性密切相关[5]，且其核心蛋白凡客蛋白(Van Gogh protein, VANGL2)和蓬乱蛋白(dishevelled，DVL2)等还能够介导微管等细胞骨架动力学变化。然而，这两种蛋白是否参与了血流灌注减少诱导的内皮细胞骨架重排还未见报道。本课题组在细胞水平的研究显示两者在不同流速的血流作用下差异表达，本研究进一步在动物水平上探索其与内皮细胞炎性反应以及细胞骨架重排之间的关系，为探究血流灌注改变导致血管炎性反应的机制提供新的资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：SPF级的新西兰兔15只，2月龄，体质量(2.0±0.2)kg(重庆医科大学实验动物中心[许可证号：SCXK(渝)2018-2003])。

1.1.2 试剂：GAPDH 抗体、DVL2 抗体、γ-tubulin抗体、MCP-1 抗体、BBS8 抗体、 VANGL2 抗体以及羊抗兔二抗、兔抗小鼠二抗和兔抗羊二抗等(Proteintech公司)；BCA定量试剂盒、蛋白上样缓冲液、Tween-20、PMSF(100 mmol/L)(上海碧云天生物技术有限公司)；PBS干粉、SDS-PAGE配胶试剂盒、高效Ripa组织/细胞快速裂解液、glycine/SDS/Tris(SoLarbio公司)；PCR引物(上海生工生物工程公司合成)；CLarityTMWestern ECL Substrate(Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 兔的分组及处理：将兔分为对照组、套管组(参考文献[5]的方法行左侧颈动脉套管术建立兔颈动脉狭窄模型，喂以正常饲料)、高脂组(喂以高脂饲料，成分为：5%猪大油、1%白糖、2%胆固醇、0.12%丙基硫氧嘧啶、1%维生素D、0.125%硫酸亚铁)。……