精子发生调控因子重组人HSF5的原核表达、活性检测与结构预测

钟洪莉，肖城良，史祥睿，代宇婕，刘 威*，张庆华*

(1.陆军军医大学大坪医院 妇产科，重庆 400042；2.华中科技大学 生命科学与技术学院，湖北 武汉 430065；3.沈阳化工大学 化学工程学院， 辽宁 沈阳 110021； 4.陆军军医大学 全军免疫研究所， 重庆 400038)

热休克转录因子(heat shock transcription factors，HSFs)是真核生物中一个重要的转录因子家族，在细胞应激、分化、组织发育与机体繁殖中发挥了重要作用[1]。人类基因组共编码6种HSFs：HSF1、HSF2、HSF4、HSF5、HSFX和HSFY，均可识别并结合目的基因启动子中的热休克元件(heat shock elements，HSEs)。男性不育是一个全球性的健康问题，精子质量下降是男性不育的主要原因，HSF家族与精子发生关系密切[2]。最新研究报道hsf5编码基因缺失的斑马鱼，雄性出现严重不育[3]。由于之前HSF5的相关研究甚少，阻碍了人们对于其活性机制的进一步研究。与其他HSFs类似，HSF5包含多个结构域，其中有一个高度保守的DNA结合结构域。目前已知，该蛋白仅在睾丸中表达，但具体功能未知。本研究目的在于获得可溶性重组人源HSF5(recombinant human HSF5,rhHSF5)蛋白的表达，并对其与热休克元件结合的结构模型进行预测，为进一步解析HSF5结构、揭示HSF5的调控机制提供条件，为不育的治疗干预提供可能。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种和质粒：质粒pET-22b(+)、大肠杆菌菌株DH5α和菌株BL21(DE3)为本实验室保存。

1.1.2 主要试剂盒：包含HSEs的寡聚核苷酸(北京擎科新业生物技术有限公司)；质粒抽提试剂盒(Omega公司)；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、考马斯亮蓝染色液、Bradford蛋白质量浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；蛋白marker、DNA ladder(赛默飞世尔科技有限公司)；鼠抗His-Tag一抗(Cell Signaling公司)、羊抗鼠抗体二抗(Elabscience公司)。……