NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对哮喘小鼠气道炎症反应及细胞焦亡的调控作用

惠超 刘馨

（锦州医科大学附属第一医院检验科，辽宁锦州 121000）

支气管哮喘是儿科常见的呼吸系统疾病，是一类以可逆性气流受限为特征的慢性气道炎症性疾病，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等多种炎性细胞在气道内大量浸润所介导的炎症反应、细胞焦亡与该病的发病密切相关［1-2］。目前，哮喘发病的具体分子机制及发病过程中炎症反应、细胞焦亡的调控机制尚不十分清楚。NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（nod-like receptor，pyrin domain containing3，NLRP3）是在呼吸系统内发挥重要作用的模式识别受体，与凋亡相关斑点样蛋白、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1，caspase-1）组成炎症小体，激活后的生物学效应是生成裂解型caspase-1（cleaved caspase-1），促进白细胞介素（interleukin，IL）-1β及IL-18的释放，并介导炎症反应，同时促进Gasdermin D（GSDMD）剪切为GSDMD-N并介导细胞焦亡［3-4］。已有哮喘相关的研究证实哮喘患者血清中IL-1β、IL-18的含量增加［5-6］，哮喘小鼠肺组织中NLRP3表达增加［7］，但NLRP3在哮喘发病中的直接生物学作用尚未见报道。本研究将通过NLRP3基因敲除（knockout，KO）的方式观察NLRP3在支气管哮喘发病中的作用，具体探究NLRP3对哮喘小鼠气道炎症反应及细胞焦亡的调控作用，以期为今后深入认识哮喘的发病机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物

NLRP3野生型（wild type，WT）C57BL/6J小鼠、NLRP3KOC57BL/6J小鼠均购自上海南方模式生物研究中心。

1.2 试剂与仪器

卵白蛋白（ovalbumin，OVA）、氢氧化铝凝胶（Sigma公司，美国），苏木精-伊红染色试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），IL-1β、IL-18的酶联免疫吸附法检测试剂盒（上海酶联生物科技有限公司），NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD-N及β-actin一抗（Abcam公司，美国）。

全身体积描记检测系统（巴克西科公司，美国），显微镜（尼康公司，日本），酶标仪（南京德铁实验设备有限公司），凝胶电泳系统（Bio-Rad公司，美国），凝胶成像系统（上海勤翔科学仪器有限公司）。……