健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞生物学功能的影响

尚官红，王晓丽，刘向哲

(1.河南中医药大学，河南 郑州 450046；2.南阳张仲景医院，河南 南阳 473000；3.河南中医药大学第一附属医院，河南 郑州 450000)

缺血性脑血管疾病(Ischemic cerebral vascular disease，ICVD)是临床常见的由脑血管病变导致的神经系统性疾病，严重威胁人类健康[1-2]。现代医学认为，血管内皮细胞(Endothelial cells，ECs)损伤是脑血管疾病发生的重要机制之一。内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)主要来源于骨髓，是ECs的前体细胞，可形成ECs并促进血管的形成[3-4]。提高EPCs的增殖及迁移能力，促进脑缺血部位的血管再生,是目前的研究重点。

健脾补肾活血方主要由黄芪、党参、白术、桑寄生、杜仲、牛膝、丹参、肉苁蓉、川芎、石菖蒲、甘草组成，具有健脾补肾、活血通络作用。方中丹参、黄芪能显著增加EPCs细胞数量，促进内皮修复[5-8]。课题组前期研究结果表明，健脾补肾活血方能改善缺血/再灌注大鼠的神经功能评分，缩小脑梗死的面积，其作用机制可能与增加外周血中EPCs水平有关[9]。本实验以分离出的大鼠骨髓源内皮祖细胞(Bone marrow-derived endothelial progenitor cells，BMEPCs)为研究对象，探讨健脾补肾活血方对大鼠BMEPCs增殖、迁移和黏附能力的影响，为健脾补肾活血方的临床应用提供理论和实验基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物：健康清洁级SD雄性大鼠5只，4～5周龄，平均体重(100±10)g，生产许可证号[SCXK(辽)2015-0001]，购自辽宁长生生物科技有限公司。大鼠饲养温度控制在(22±1)℃、湿度45%～55%、光照节律12 h∶12 h,自由进食饮水。

1.1.2 主要仪器：CO2培养箱(型号HF-90，上海力申公司)、超净工作台(型号SW-CJ-2FD，苏州净化公司)、酶标仪(型号ELX-800，美国Biotek公司)、倒置相差显微镜(型号IX53，日本Olympus公司)、显微镜拍照系统(型号DP73，日本Olympus公司)、超速冷冻离心机(型号H-2050R，湖南湘仪公司)。……