益肾健脾方对去卵巢骨质疏松症大鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节研究❋

吕文学， 蔡余力

(山东中医药大学附属医院骨关节科， 济南 250014)

绝经后骨质疏松症是以全身骨密度降低、骨微结构破坏、易并发骨折为主要临床特征的女性常见骨代谢疾病之一[1]。近年来研究表明[2，3]，Wnt/β-catenin信号通路与骨组织细胞生命活动周期密切相关。同时，Wnt/β-catenin信号通路及其相关蛋白的表达异常与绝经后骨质疏松症的发病机制相关。中医理论认为，骨质疏松是由于肾精亏虚导致骨髓生化乏源、骨骼失养所致[4]。益肾健脾方是由补骨脂等中药组成的用于治疗绝经后骨质疏松症中药方剂，目前已在临床中用于骨质疏松的治疗且疗效明显。然而益肾健脾方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制尚不甚明确。本文通过研究益肾健脾方对去卵巢大鼠骨质疏松症及肾组织Wnt/β-catenin信号通路的调节作用，旨在从分子生物学角度阐述益肾健脾方对骨质疏松症的作用机制。本研究已通过实验动物伦理委员会审查,批准号2020-12号。

1 材料与方法

1.1 动物

健康清洁级(SPF)雌性SD大鼠，6月龄，体质量(240±20)g，购自山东省实验动物中心，实验动物生产许可证号SYXK(鲁) 2019 0007。动物饲养条件为温度24 ℃，湿度45%，正常光照，自由饮食，动物饲料为SPF级实验大鼠维持饲料，饲养于实验动物房。

1.2 药品与试剂

益肾健脾方组成：熟地黄20 g，淫羊霍12 g，党参15 g，川牛膝18 g，云苓15 g，白术15 g，山药18 g，牡蛎30 g，杜仲12 g，补骨脂12 g，骨碎补21 g，龙骨30 g，丹皮12 g，甘草6 g，由山东中医药大学附属医院药剂科制剂中心统一制备；Wnt3a(货号AF8352)、β-catenin(货号AF0066)、GAPDH抗体(货号AF1186)、RIPA蛋白裂解液(货号P0013E)、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒(货号P0012)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(货号A0208)，购自上海碧云天公司；……