本氏烟转录因子bZIP60多克隆抗血清的制备及其应用

张浩，庄新建，郭枭，徐红梅，贺振，张坤

扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州文昌中路567号，225000

内质网（Endoplasmic reticulum，ER）是植物细胞重要的具备膜和管道系统的细胞器，是分泌蛋白、膜蛋白合成、糖基化修饰的场所[1]。ER具有极强的内稳态，但仍然有很多因素（病毒和细菌侵入等）导致内稳态失衡，未折叠或错折叠蛋白蓄积，膜双层结构组成紊乱，进而引起内质网应激（ER stresses）[2]。当内质网蛋白的折叠受到逆境等因素干扰时，未折叠蛋白和错误折叠蛋白就会大量积累，细胞就会启动一种非常保守的机制——未折叠蛋白应答（Unfolded Protein Response，UPR）通路激活[3]。植物细胞主要通过两条通路来感受和传导内质网压力，其中一条通路由S1P/S2P-bZIP17/bZIP28介导，而另一条通路由IRE1-bZIP60mRNA介导[4]。

NbbZIP60是一个含有跨膜结构域且定位于内质网膜的转录因子，而NbIRE1则是一种内质网I型跨膜蛋白，在细胞质侧有激酶和RNase结构域[5]。在正常情况下，NbbZIP60蛋白能定位于内质网膜上；bZIP60转录的初级转录物（pri-mRNA） 具有保守的茎环结构，在逆境胁迫（如高温，病原菌侵染等）下，该结构能被定位于内质网的IRE1剪接，而产生阅读框移码，从而编码不含跨膜结构域，但携带有核定位信号的NbbZIP60成熟蛋白。该蛋白在核转运复合物的作用下能被转运到细胞核内，从而启动下游分子伴侣基因的转录[6]。在沉默bZIP60时, 普通烟（Nicotiana attenuata）更易感烟草赤星病（Alternaria alternata）；在TuMV侵染拟南芥（Arabidopsis）时能显著诱导bZIP60的剪切[7]；在沉默NbbZIP60时，马铃薯X病毒（potato virus X，PVX）更易扩散到本氏烟（Nicotiana benthamiana）的上部叶；IRE1-bZIP60可以限制PVX在本氏烟中的侵染[8]。

鉴于本氏烟作为研究植物病毒的……