东北地区男性不育患者的Y染色体微缺失分析

冷旭，潘伯臣，孙陆

（中国医科大学附属盛京医院生殖中心男科，沈阳 110004）

Y染色体Yq11区无精子症因子（azoospermia factor，AZF）是男性精子生成的决定性基因，2013年欧洲男科学会和欧洲分子遗传学质量网络联合制定的Y染色体微缺失诊断指南中，建议无精子症或精子浓度＜2×106/mL的严重少精子症患者行微缺失检测，并推荐三区的微缺失诊断，即AZFa、AZFb和AZFc，对应引物组sY84、sY86、sY127、sY134、sY254和sY255，该引物组可满足常规诊断。但临床实际工作中，各实验室开展的Y染色体微缺失检测位点却不尽相同，我院所行微缺失检测包括AZFa、AZFb、AZFc及AZFd 4个区域12个位点，本研究拟针对这些位点探讨男性不育患者Y染色体微缺失的种类及其与精子检测结果之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床资料：对2018年1月1日至2019年12月31日期间于中国医科大学附属盛京医院就诊的3 720例男性不育患者（均来自于辽宁、吉林、黑龙江地区）行AZF检测。纳入标准为精子浓度＜5×106/mL的严重少精子症或顽固型少弱精子症，药物治疗未见好转。采用真空采血管采集患者静脉全血2 mL（EDTA抗凝）。

1.1.2 试剂与仪器：Y染色体微缺失检测试剂盒由中国医科大学附属盛京医院遗传研究室专门定制提供。耐热 DNA 聚合酶（Taq酶，美国Life公司）；4种核苷酸单体（dNTPs，美国Life公司）；Roche Light-Cycler 480 Ⅱ（瑞士罗氏诊断公司）；ABI Prism 7500（美国Life公司）；Bio-Rad CFX96 荧光定量 PCR 仪（美国伯乐公司）。

1.2 方法

采用实时荧光PCR方法检测Y染色体微缺失。检测试剂盒由中国医科大学附属盛京医院遗传研究室专门定制提供，以Y染色体AZF区的12个基因位点（sY84、sY86、sY127、sY134、sY143、sY157、sY239、sY242、sY254、sY255、sY145、sY152）为靶序列，设计特异性引物及荧光探针，采用PCR及荧光标记探针技术，对每个待检样本进行4个三重 PCR 反应，快速检测样本中Y染色体AZF区12个位点是否存在缺失。……