缝隙连接蛋白43在氧诱导视网膜病变小鼠视网膜中的动态表达及意义

王昕，刘向玲，苏绍波

(1.新乡医学院第三临床学院 眼科，河南 新乡 453003；2.新乡医学院，河南 新乡 453003)

视网膜新生血管增殖是早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity，ROP)[1]、糖尿病视网膜病变[2]、新生血管性青光眼[3]等多种眼部血管性疾病发生发展的基础。氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy，OIR)小鼠模型是研究视网膜新生血管形成及其转归最为常用的一种动物模型。缝隙连接蛋白43(connexin43，Cx43)是连接蛋白家族中表达最广泛的亚型，在各种疾病动物模型中研究较多[4-7]。但目前尚无OIR小鼠视网膜Cx43表达变化的相关研究报道。本研究的主要目的是了解高氧诱导的OIR小鼠视网膜中Cx43在不同时期的表达水平，探讨Cx43与视网膜新生血管形成的关系。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器山羊抗兔二抗(谷歌生物科技有限公司)；Cx43抗体、GAPDH抗体(英国Abcam公司)；Isolectin B4-594(Molecular Probes)；智能控氧仪(杭州艾普仪器设备有限公司)；Tanon发光成像仪(上海天能科技有限公司)；手术显微镜(日本尼康公司)；共聚焦显微镜(上海仁科生物有限公司)。

1.2 实验动物分组及取材选用北京维通利华实验动物技术有限公司提供的7 d龄C57BL/6N小鼠(批号SCXK2016-0006)80只，雌雄不限，体质量2.0～3.0 g，采用随机数表法将小鼠分为OIR组(40只)和正常对照组(40只)。OIR组小鼠用于建立OIR模型，对照组小鼠在正常空气环境下饲养，室温控制在(23±2)℃，同时每3 d更换1次垫料，保持氧舱干燥。分别于12 d龄(P12)、14 d龄(P14)、17 d龄(P17)和21 d龄(P21)随机抽取两组小鼠各10只(20眼)，CO2法处死并摘除眼球。3只(6眼)进行视网膜铺片观察视网膜新生血管增殖情况；剩余7只小鼠(14眼)取视网膜组织做Western blot，分析Cx43表达水平的变化。……