茶叶中啶虫脒残留分析方法的开发

张 艳 安宝东 阎钼琳 丁明海

（1.山东省科建检测服务有限公司，山东 日照 276800；2.山东省日照高新区河山镇农业综合服务中心，山东 日照 276800）

1.引言

啶虫脒，氯化烟碱类化合物，英文通用名为Acetamiprid，其化学名称为N-(N-氰基-乙亚胺基)-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺，化学式为C10H11ClN4。啶虫脒是一种新型广谱的具有杀螨活性的杀虫剂，其作用方式为触杀和胃毒，同时具有较强的渗透作用。啶虫脒广泛用于水稻、蔬菜、果树、茶叶的蚜虫、飞虱、蓟马、部分鳞翅目害虫等的防治。目前我国检测茶叶中啶虫脒的方法主要是采用液相色谱-串联质谱法，使用固相萃取柱进行净化，但此种净化步骤较为复杂，适合于多种组分的化合物分析。因此本研究通过建立茶叶中啶虫脒的快速测定法，简化净化步骤，提高分析效率，回收率和精密度高，适用于茶叶中啶虫脒的残留检测。

2.材料与设备

Agilent 1290-Ultivo超高效液相色谱-质谱联用仪；KQ-500B超声波清洗器；SL-2000A多功能粉碎机；XW-80A微型旋涡混合仪；Scout电子天平（百分之一）；移液枪及各种玻璃仪器。

乙腈，默克股份两合公司，HPLC级；水，上海麦克林生化科技有限公司，HPLC级；甲酸，上海麦克林生化科技有限公司，HPLC级；氯化钠，国药集团化学试剂有限公司，分析纯；Florisil选择性吸附剂（60～100目），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；石墨化碳黑，上海麦克林生化科技有限公司；啶虫脒标准品（1000±20μg/mL），北京坛墨质检科技有限公司。

3.试验方法

3.1 前处理步骤

提取和净化：取待测样品（基质），放入多功能粉碎机中制成粉末，称取匀浆试样5.00 g±0.10 g（基质量记作M）于具塞试管中，添加标准物质混匀静置30 min后（样品空白不需要添加标准物质），加入50.0 mL乙腈提取剂（提取剂加入体积记作V），超声提取15 min，然后加入2.00g氯化钠，涡旋混合30s，静置后吸取5.0mL上清液，加入0.20gFlorisil选择性吸附剂和0.10g石墨化碳黑，涡旋混合30s，静置后取1.0mL上清液，根据实际情况稀释（提取液稀释倍数记作f），取适量稀释液过0.22 μm有机微膜，测试。

3.2 仪器测定

仪器：Agilent 1290-Ultivo超高效液相色谱-质谱联用仪；

色谱柱：Eclipse Plus C18, 1.8 μm, 2.1×50 mm；

柱温：40.0。C；进样量：3.00μl；流动相A：0.1%甲酸缓冲液；流动相B：乙腈；

离子源：AJS-ESI；扫描方式：MRM模式；气体温度：300。C；气体流速：7.0 L/min；

鞘气温度：250。C；鞘气流速：11.0 L/min；MS2 Heater：65。C；MS1 Heater：65。C；

喷雾：15.0 psi；

梯度洗脱条件见表1

表1 流动相梯度洗脱（见下表）

1.00 90.00 10.00 3.00 50.00 50.00 3.30 0.00 100.00 3.50 90.00 10.00 5.00 90.00 10.00

MRM质谱条件见表2

表2 MRM监测条件参数

3.3 结果计算

使 用Agilent MassHunter Workstation Data Acquisition软件采集并用Agilent MassHunter Quantitative Analysis（for QQQ）处理图谱数据。

使用Microsoft Office Excel软件对试验数据进行统计处理，计算样品残留量及平均值。

样品实际残留量按式（1）进行计算：

式中：Ci为样品实际含量，mg/kg；

Ci*为经标准曲线定量得到的浓度，mg/L；

V为提取剂加入体积，mL；

f为提取液稀释倍数；

M为基质量，g；

回收率按式（2）进行计算：

式中：W为回收率，%；

Ci为样品实际含量，mg/kg；

C0为理论添加浓度，mg/kg。

相对标准偏差按照式（3）进行计算：

式中：RSD为相对标准偏差，%；

C平均为样品实际含量的平均值，mg/kg；

Ci为样品实际含量，mg/kg；

n为平行样品个数。

式中：ME为基质效应，%；

bA为以纯溶剂为定容介质配制的标准曲线斜率；

bB为以空白基质溶液为定容介质配制的标准曲线斜率；

4.检测方法确证

4.1 标准曲线和线性

分别以乙腈和空白基质溶液为定容介质配制一系列质量浓度为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的标准溶液，在3.2确定的方法条件下对标准溶液进行测定，每个浓度采集3个平行，以5个浓度的标准溶液绘制1条标准曲线。

4.2 基质效应考察

分别以乙腈和空白基质溶液为定容介质配制一系列质量浓度为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的标准溶液，分析时以乙腈、空白基质溶液的顺序进行检测，以考察基质的影响。基质效应(Matrix Effect)评价标准：对纯溶剂与空白基质溶液配制标准曲线的斜率进行比较，若基质效应ME %的绝对值≥20%，说明基质效应明显。若基质效应ME %绝对值＜20%，说明基质效应不明显。

4.3 准确度和精密度试验

设计1个溶剂空白对照组、1个样品空白对照组和4个添加水平（0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.50 mg/kg、10 mg/kg（MRL值））,每个添加水平5个重复。对空白对照组与4个添加水平组共21个前处理后得到的样品各采集1针（溶剂空白对照不进行前处理）。

4.4 定量限

以最小添加浓度作为方法的定量限，啶虫脒在茶叶中的定量限为0.05 mg/kg。

4.5 专属性

所测空白样品在被试物出峰区间的信号应小于LOQ添加水平响应的30%。

5.结果与讨论

5.1 标准曲线和线性

在本试验条件下进行测定，以标准溶液的浓度对响应值（峰面积）进行线性回归，以乙腈为定容介质配制的标准曲线：y=472517.4025314*x+968.657281，R2 = 0.999；以空白茶叶基质溶液为定容介质配制的标准曲线：y=546684.351593*x+367.997302，R2=0.999

5.2 基质效应

标准曲线由5个校准点组成（不包括原点），浓度范围为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L。按照乙腈标准溶液、空白基质溶液的顺序进行检测，以标准溶液的浓度对响应值（峰面积）进行线性回归。

结果表明啶虫脒在茶叶中检测基质效应不明显，基质效应ME的绝对值为15.7%。

5.3 准确度与精密度

空白茶叶基质中四个添加水平0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.50 mg/kg、10 mg/kg的平均回收率为88%、102%、94%、106%，相对标准偏差为1.9%、4.4%、0.95%、5.2%。结果详见表3。

表3 准确度与精密度试验数据表

5.4 定量限

以最小添加浓度作为方法的定量限，啶虫脒在茶叶中的定量限为0.05 mg/kg。

5.5 专属性

所测乙腈、空白基质样品在啶虫脒出峰区间的信号均小于LOQ水平响应的30%。

5.6 检测方法有效性评价

本验证试验建立了茶叶啶虫脒残留分析方法，茶叶样品用乙腈提取，Florisil选择性吸附剂和石墨化碳黑吸附剂净化，采用Agilent 1290-Ultivo超高效液相色谱-质谱联用仪测定，采用保留时间（3.008 min）及定性离子对（223.0/90.0）定性，采用标准曲线-外标法定量（定量离子对223.0/125.9）。试验结果满足《农作物中农药残留试验准则》（NY/T 788-2018）对残留检测方法的要求，适合番茄中异菌脲残留的检测。