敲低PLK1对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的抑制作用及其机制

赵芃芃,白小芳,卢凤丽,李思园,谭 丛,蒋胜群,郁 佳,秦 梅

(蚌埠医学院第一附属医院眼科,蚌埠 233000;*通讯作者,E-mail:bbmcqm@163.com)

脉络膜黑色素瘤(chroidal melanoma,CM)是成人眼内最常见的恶性肿瘤,在全球发病率占眼内恶性肿瘤的首位,恶性程度及致死率均较高,中位生存时间仅为3-5月[1]。目前，CM最主要的两种治疗方法有两种：手术和放射性敷贴治疗。发病早期可造成视力损害，晚期则眼外蔓甚至危及生命[2],但由于发病隐匿，发现时多为晚期，故而早期诊断治疗显得尤为重要。PLK1属于polo样激酶家族中的一员,大量研究表明PLK1在人类肿瘤发生发展中具有重要作用,但PLK1在脉络膜黑色素瘤中的作用国内外尚无研究报道。因此,本研究拟通过分子生物学和表观遗传学方法探究PLK1对CM细胞增殖的影响及其可能分子机制,以期为CM的临床诊断和治疗提供新的靶点及思路。

1 材料和方法

1.1 主要试剂

RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶消化液购于Gibco生物公司(美国);CCK-8试剂盒、青链霉素双抗溶液、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶液、凝聚胺溶液购自睿捷生物(合肥);PLK1抗体购自Abcam公司(美国);BUBR1、GAPDH抗体购于武汉三鹰生物技术公司;组蛋白H3、H3T3ph抗体购于杭州景杰生物公司;RT-qPCR试剂盒购于南京诺唯赞生物公司;细胞周期检测试剂盒购于南京凯基生物公司;PLK1敲低慢病毒购于上海吉玛基因生物公司;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)检测试剂盒购于碧云天生物公司(上海);所有引物由滁州通用生物公司合成。

1.2 细胞培养

人脉络膜黑色素瘤C918细胞购于南京凯基生物公司,人脉络膜血管内皮细胞、人脉络膜黑色素瘤MuM-2B、MuM-2C细胞购于武汉普诺赛生命科技有限公司。……