睾酮对棕榈酸诱导的睾丸支持细胞受损的保护作用

穆杨，罗凌波，杨菁

(武汉大学人民医院生殖医学中心，武汉 430060)

睾丸支持细胞为精子细胞提供结构支持，参与构成血睾屏障和生精微环境，并发挥旁分泌作用，在精子的免疫豁免以及成熟中发挥重要作用。肥胖会破坏血睾屏障，损害睾丸支持细胞功能，进而损害男性的生育力[1-5]；睾丸局部游离脂肪酸水平过高，会刺激睾丸支持细胞产生过多的活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)，这些不稳定基团攻击生物膜结构和细胞DNA，会导致细胞发生凋亡。研究发现，肥胖患者睾酮水平显著下降[6-7]，使用睾酮替代疗法可增加人体的血清睾酮水平[8]，并抑制生精细胞的凋亡[9]；睾酮可抑制睾丸支持细胞的氧化损伤[10]。然而，睾酮对肥胖导致的睾丸支持细胞受损是否具有保护作用，目前仍未见相关研究报道。本研究以棕榈酸(palmitic acid，PA)体外刺激模拟体内的高脂环境处理小鼠睾丸支持细胞系(TM4)建立体外细胞损伤模型，评价睾酮对支持细胞的保护性作用。

材料与方法

一、主要实验材料及试剂

TM4小鼠睾丸支持细胞购自美国模式培养物集存库(American type culture collection，ATCC)。睾酮购自爱必信(上海)生物科技有限公司(货号abs816670)；DMEM培养基和胎牛血清均购自美国Gibco公司；CCK8检测试剂盒购于日本同仁化学；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)和谷胱甘肽(glutathione，GSH)检测试剂盒均购自南京建成生物技术有限公司；抗Occludin兔单克隆抗体购自英国Abcam。其余所有实验试剂的纯度均为国产分析纯。

二、实验方法

1.TM4细胞培养：将TM4细胞接种于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的条件下培养，取处于对数生长期的细胞用于后续实验。……