WWP2在急性淋巴细胞白血病细胞系中的表达及其对多柔比星药物敏感性的影响

徐海琪，黄心悦，张丽君

（中国医科大学附属第一医院血液内科，沈阳 110001）

含有E3泛素蛋白连接酶2的WW结构域（recombinant WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase 2，WWP2）是编码Nedd4家族成员中一种重要的E3连接酶［1-3］。WWP2参与包括膜蛋白转运、蛋白质降解、信号转导以及转录凋亡等多种细胞过程，并与肿瘤等多种疾病的发生发展有关［4］。急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）是血液系统的一种异质性恶性肿瘤，预后较差，其病因和发病机制目前尚不明确。本研究拟观察WWP2对ALL细胞系生物学行为的可能的影响，旨在探讨该基因对ALL发生发展的潜在作用。

1 材料与方法

1.1 材料

ALL细胞系Jurkat来自中国医科大学附属第一医院血液研究室。RPMI-1640及PBS购自美国Gibco公司；polybrene、两性霉素B及嘌呤霉素购自日本Sigma公司；Higene购自中国普利莱公司；质粒购自中国吉凯公司；多柔比星（doxorubicin，dox）购自美国辉瑞制药有限公司；CCK-8试剂盒购自日本同仁化学公司；细胞凋亡试剂盒及组织活性氧购自中国碧云天生物技术公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：用含10%FBS的RPMI-1640培养基，于37℃孵箱中培养Jurkat细胞。细胞传代3次后行台盼蓝染色，应用细胞计数仪计数细胞，存活率≥97%即可进行后续实验。

1.2.2 细胞转染：用PBS清洗细胞，接种至6孔板中（密度60%～70%），更换含polybrene（6 μg/mL）的培养基。分别加入60 μL含WWP2shRNA及空载的病毒液孵育，48 h后再滴加60 μL，48 h后更换培养瓶，补5～10 mL培养液，观察细胞生长情况。转染结束后，向培养基中加入10 μg/mL嘌呤霉素进行阳性筛选。将1 mL 0.9% NaCl、24 μL转染试剂、HA质粒15 μL、WWP2质粒20 μL混匀后，室温静置20 min，加入细胞培养基中，36～48 h后观察细胞形态，进行后续实验。

1.2.3 CCK-8实验：将转染后Jurkat细胞（3.0×105/mL）接种于96孔板中，100 μL/孔。设置空白……