秦思文,姜红
(中国医科大学附属第一医院儿科,沈阳 110001)
衰老和慢性肾脏疾病都会影响肾脏功能,最终导致肾纤维化。肾纤维化是一种慢性、进行性过程,目前尚无减缓肾纤维化的靶向疗法[1]。过氧化物酶2(peroxiredoxin2,Prx2)是哺乳动物细胞中常见的抗氧化酶,主要存在于细胞质和细胞膜中,参与凋亡、增殖、分化、炎症、癌症和先天免疫缺陷等多种细胞过程[2]。Prx2在肺脏[3]、肝脏[4-5]等实质器官纤维化疾病过程中都有特异性表达。然而,肾纤维化组织中Prx2表达情况尚未见报道。本研究拟探讨Prx2在肾纤维化大鼠肾组织中的表达情况,旨在为阐明其与肾脏纤维化的关系提供依据。
将24只8周龄、体质量180~200 g的雄性SD大鼠(购自北京维通利华公司)随机分为假手术组(n=8)和单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)组(n=16,UUO组)。假手术组大鼠戊巴比妥钠麻醉后沿腹中线开腹,自中下1/3 交界处至剑突,暴露左侧肾脏及左输尿管,游离左侧输尿管而不结扎。UUO组大鼠入路方式同假手术组,暴露左侧肾脏及左输尿管结扎输尿管上下两端,中间剪断。假手术组术后3 d处死大鼠并获取肾组织,UUO组分别于术后3、7、14、21 d处死大鼠并获取肾组织。一部分肾组织4%多聚甲醛固定24 h,制作石蜡切片,另一部分保存于-80 ℃冰箱待用。
1.2.1 HE染色:2组术后3 d的石蜡切片(2 μm)染色,按照染色试剂盒(中国索莱宝公司)说明书操作,光镜下观察肾脏组织形态。
1.2.2 免疫组化染色检测大鼠肾脏组织中Prx2的表达:2组术后3 d的石蜡切片(4 μm)常规脱蜡、水化,浸入柠檬酸缓冲液,微波炉加热,修复抗原冷却后洗涤,血清封闭;……