Nav1.6-RNAi通过AKT通路抑制口腔鳞癌细胞增殖作用研究

许 乐，洪礼琳，刘玮佳，胡媛平，蒋 勇

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是最常见的口腔颌面部恶性肿瘤，占口腔癌病例的90%以上，其年患病率超过500 000例。OSCC在发病早期即可出现对周围组织的浸润与扩散或者远端转移，因此治疗较困难。虽然近年来对OSCC的治疗有了很大进展，但其主要的治疗方法(如手术、化疗等)有较大的副作用，故寻找一种新的治疗方法十分有意义。

电压门控钠通道(voltage-gated sodium channel，VGSC)已成为治疗OSCC新的研究方向。VGSC通常由一个α亚基与一个或多个β亚基组成，根据α亚基的差异，可分为Nav1.1-Nav1.9和Nax共10种亚型，其通过调节Na跨膜转运从而发挥作用，是细胞动作电位产生和传播的基础。越来越多研究表明，VGSC与多种肿瘤的增殖关系密切，其中Nav1.6的作用尤为明显。现通过研究Nav1.6在正常及OSCC中表达差异，初步探讨Nav1.6与OSCC的可能关系及机制，以期为临床上早期诊断OSCC和利用VGSC阻断剂治疗OSCC提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试剂

LipoFiter脂质体转染试剂(货号：HB-TRLF-1000)和Nav1.6-RNAi 购自上海汉恒生物科技有限公司, TB GreenPremix Ex TaqⅡ(货号：RR820A)和PrimeScriptRT Master Mix (货号：RR036A) 购自日本TAKARA公司，Nav1.6抗体(货号：ab230654，浓度：1 ∶500) 购自美国Abcam公司，CyclinD1抗体(货号：55506S，浓度：1 ∶500)、C-myc抗体(货号：18583S，浓度：1 ∶500)、AKT抗体(货号：4685S，浓度：1 ∶500)和p-AKT抗体(货号：4060S，浓度：1 ∶500) 均购自美国Cell Signaling Technology公司，细胞周期与凋亡检测试剂盒(货号：C1052) 购自上海碧云天生物技术有限公司，所有引物均由生工生物(上海)股份有限公司合成。

1.2 组织收集与细胞培养

收集6例仅患有OSCC患者术中切除的癌症组织，患者年龄50～70(64.5±3.86)岁，另收集6例口腔手术术中切除的非癌症组织，以上组织收集后均立即固定保存。本实验所使用的CAL-27细胞为安徽省口腔疾病重点实验室所保留，用于研究OSCC的发病机制。……