靶向下调Cav3.1诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡

江 旋，许为青，潘春晨

头颈部肿瘤在世界范围内占据第六位，喉癌是头颈部肿瘤中较常见的恶性肿瘤，世界上每年约有90 000人死于喉癌，超过95%的喉癌被诊断为鳞状细胞癌。它的病因及作用机制都还没有明确，所以从分子学探讨其作用机制很有必要。近年来，关于T型钙离子通道在肿瘤中的研究越来越多。这些通道在肿瘤细胞系中的表达已广泛报道于乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、非小细胞肺癌、视神经母细胞瘤、口腔鳞癌。然而，在喉鳞癌中关于Cav3.1的报道几乎没有。该研究通过免疫组化法、RT-PCR、Western blot检测Cav3.1在喉癌癌组织和癌旁组织中的表达，并通过互补siRNA针靶向下调Cav3.1的表达，探讨Cav3.1是否参与介导喉癌细胞的增殖与凋亡。

1 材料与方法

1.1 材料

1

.

1

.

1

样本采集 收集30例喉癌组织和癌旁正常组织(距肿瘤边缘至少0.5 cm)，来源于2018年3—10月在安徽医科大附属省立医院行手术治疗的患者，切除的标本均立即放入液氮中保存，术后病理证实癌组织为鳞状细胞癌，癌旁组织无癌细胞，本研究经医院伦理委员会批准。30位喉癌患者，其中Ⅰ期患者15例，Ⅱ期患者9例，Ⅲ期患者为3例，Ⅳ期患者3例，获得组织标本来源患者的知情同意，年龄46～66(53.3±2.6)岁，30例均为男性。

1

.

1

.

2

主要试剂 DMEM 培养基购自Gibco公司，胎牛血清购自Hyclone公司，Cav3.1抗体购自Santa Cruz公司，BCL-2、BAX、Cleaved-caspase-3抗体购自Proteintech公司，Simple Total RNA kit 购自天根生化科技有限公司，BCA试剂盒、ECL试剂盒购自江苏南通碧云天公司，qPCR Mix 试剂盒购自TaKaRa公司，Cell Counting Kit-8、RPMI-1640培养基购自上海生工生物工程有限公司，免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。

1

.

1

.

3

细胞培……