原花青素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化作用的研究

刘亚军，丁如愿，杨 刚，徐建光，王元银

目前，口腔颌面部骨缺损的修复治疗仍被临床医师视为巨大的挑战之一。人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞，其作为种子细胞，在颌面部缺损修复治疗上具有广阔的应用前景。近来，黄酮类、酚类、生物碱等天然小分子化合物被证明可以有效促进干细胞向成骨细胞分化。因具有来源广泛、结构稳定、诱导高效、分化可控等优点，日渐成为研究热点。其中，原花青素(proanthocyanins, PAC)作为酚类化合物，具有优良的抗菌、抗炎、抗肿瘤及抗氧化的性能，有研究表明PAC可以促进人脱矿牙本质再矿化，从而增强牙本质粘接效果，也有研究表明PAC可以抑制大鼠关节内破骨细胞活性，促进成骨细胞分化调节骨代谢，但是PAC对于hDPSCs成骨分化研究较少。鉴于此，该研究观察PAC对hDPSCs的增殖及成骨分化的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

DMEM基础培养基、PBS溶液购自美国Hyclone公司，胎牛血清购自美国Corning公司，成骨诱导培养基、成脂肪诱导培养基购自美国Syagen公司，PAC购自上海麦克林生化科技公司，胶原酶Ⅰ、中性蛋白酶Ⅱ、茜素红染色液、油红O染色液、DMSO、罗丹明标记鬼笔环肽、DAPI染色液购自中国索莱宝公司，0.25%胰酶细胞消化液、青霉素-链霉素溶液、多聚甲醛、BCIP/NBT ALP显色试剂盒、ALP检测试剂盒购自中国碧云天公司，PrimeScriptbRT reagent Kit、TB Green® Premix Ex TaqⅡ购自日本TaKaRa公司，CCK-8试剂购自日本Dojindo公司，流式细胞术抗体CD31、CD34、CD45、CD44、CD73、CD90购自英国Abcam公司。细胞培养箱购自美国Thermo公司，荧光倒置显微镜购自德国Leica公司，酶联免疫检测仪购自美国Bio-tek公司，荧光定量PCR仪购自美国Stratagene公司。……