七叶皂苷钠通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制eIF4F复合物缓解大鼠肝纤维化

谢海深，周大臣，李 扬，崔 笑，熊奇如，喻宗繁

肝硬化是成年人死亡的第14个常见原因，5%～10%的患者5年内发展为原发性肝癌。肝纤维化作为肝硬化发展的早期阶段，是肝细胞对各种致病因素的抗损伤修复过程，致病因素包括肝炎病毒、胆汁淤积、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病等。肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)正常保持静止非增殖表型，慢性致病因素使HSCs激活，分泌大量胶原I(Collagen I)和胶原Ⅲ(Collagen Ⅲ)等细胞外基质(extracellular matrix, ECM)成分，沉积在Disse间隙形成瘢痕组织。真核翻译起始因子4F复合物(eukaryotic translation initiation factor 4F,eIF4F)是帽依赖性mRNA翻译的起始调控因子，eIF4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1,4EBP1) 通过自身磷酸化修饰调控eIF4F复合物的形成。七叶皂苷钠(sodium aescinate，SA)是从中药娑罗子中提取的主要活性成分，主要用于脑水肿、创伤以及手术所致肿胀等的治疗。课题组前期研究表明，SA对原发性肝癌具有明显的抑制作用，该研究将探讨SA对肝纤维化发生发展的影响机制。

1 材料与方法

1.1 材料

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实验动物及细胞株 健康雄性Sprague-Dawley大鼠，购于安徽医科大学实验动物中心，许可证号:SCXK(皖)2017-001。大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞系购于广州吉妮欧生物科技有限公司。

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药品与试剂 胎牛血清购自美国Gibco公司，青霉素/链霉素、RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自中国碧云天公司，MTT、Masson三色染色液购自中国索莱宝科技有限公司，免疫组化检测试剂盒购自北京中杉金桥公司，四氯化碳(CCl)购自中国阿拉丁生化科技有限公司，SA注射液购自山东绿叶制药有限公司，SA、雷帕霉素购自美国APExBIO公司，4EGI-1、4E1RCat购自美国MCE公司，β-actin、PI3K、AKT、4EBP1、p-4EBP1(Thr37/46)、eIF4E、eIF4G购自美国CST公司，mTOR购自美国Santa Cruz公司，α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ购自中国博士德生物工程有限公司，细胞凋亡检测试剂盒购自美国BD公司。……