有机阴离子转运蛋白1对大鼠滑膜细胞吸收甲氨蝶呤、增殖及迁移的影响

王 勇，孙 伟，高锦张，肖 宁，王 春，魏 伟

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种病因不明的全身性炎症性疾病，会导致关节畸形和骨损害进而累及全身多个脏器组织，严重情况下甚至会导致残疾。有机阴离子转运蛋白1 (organic anion transporter 1,OAT1)是溶质超家族中的一员，作为一种转运底物十分广泛的转运蛋白，主要分布在人的肾脏、肝脏、视网膜等器官。近年来，OAT1已成为肾损伤研究的热门对象之一，例如OAT1介导了顺铂的肾毒性以及重金属汞在肾脏蓄积而引起的急性肾损伤等，此外已有研究表明OAT1可介导肾脏中MTX的转运，且OAT1的表达对MTX在肾脏部位的作用存在影响。课题组近期研究显示OAT1在人和大鼠的滑膜组织中也有表达。尽管MTX作为临床上治疗RA患者的常用药物，但仍有30%左右的患者对MTX反应不佳。本实验通过Wistar大鼠建立胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis，CIA)模型，并分离培养成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells，FLS)作为实验对象，给予肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)(20 ng/ml，24 h) 刺激FLS以获得更稳定炎性FLS。采用体外转染技术调控FLS上OAT1的表达，旨在研究FLS上OAT1对MTX吸收，以及对FLS增殖效应和迁移能力的影响，并初步探讨如何解决RA患者对MTX反应不佳的问题。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器