Slit2/Robo4/Rho信号通路在野百合碱诱导的大鼠肝窦阻塞综合征中的变化及意义

徐 魁，任晓非，宋育林

肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstruction syndrome，HSOS)以前称为肝小静脉闭塞症，以窦腔和中央静脉腔向心性和非血栓性阻塞为特征。全国多中心研究显示中国HSOS住院患者的主要病因是含有吡咯烷生物碱(pyrrolizidine alkaloids，PAs)的土三七所致。HSOS涉及多种原因，发病机制复杂，PAs导致的HSOS是由于肝窦和中央静脉内皮细胞损伤和修复障碍的结果。Slit/Robo一开始被认为只在神经系统表达，有研究显示Slit2/Robo4信号通路及下游Rho信号通路与稳定内皮屏障功能有关，而HSOS发病起始于肝窦内皮细胞的损伤，Slit2/Robo4信号通路是否在HSOS发病中起到一定的作用尚无文献报道。该研究采用一种PA-野百合碱(monocrotaline, MCT)进行造模，动态观察HSOS的病理组织学变化，检测Slit2/Robo4/Rho信号通路相关分子表达，探讨其在HSOS发病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

34只SD雄性健康大鼠，SPF级，6周龄，体质量160～190 g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物许可证号：SCXK(鲁)2019 0003。

1.2 主要试剂及仪器

MCT购自美国MCE公司；天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基转移酶 (alanine aminotransferase，ALT)试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、Cdc42、Rac1、RhoA抗体购自英国Abcam公司；Robo4、Slit2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-9、MMP-2抗体购自美国Santa Cruz公司；EZ-10 Total RNA Mini-Preps Kit试剂购自上海生工Sangon Biotech公司；逆转录试剂盒(ABScriptIIRT Mix for qPCR with gDNA Remover)及RT-qPCR(2×UniversalSYBRGreen Fast qPCR Mix)试剂盒购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；酶标仪为美国Thermo公司产品；紫外分光光度计购自上海菁华科技仪器有限公司；自动曝光仪为上海培清科技有限公司产品；Real-time PCR仪为美国Bio-Rad公司产品。

1.3 实验方法

34只大鼠适应性喂养1 周后随机分为正常对照组8只，实验组26只。实验组大鼠给予 MCT 160 mg/kg灌胃处理，分批在造模后1、2 d随机处死8只、6只，剩余大鼠第4天处死。……