环化PDC-E2内硫辛酰区及其在原发性胆汁性胆管炎患者抗线粒体抗体检测中的价值

陈 蕾，李海燕，张亚琴，帅宗文,2

原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis，PBC)是一种典型的进行性自身免疫性疾病，其病理特征是肝内小胆管破坏和门脉炎症，最终导致肝硬化和肝衰竭。抗线粒体抗体(antimitochondrial antibody，AMA)是PBC中的一种常见的特异性抗体，是早期无症状PBC的重要实验室指标。然而，仍有约10%左右的PBC患者周围血中AMA始终呈阴性，给PBC临床诊断带来困难。丙酮酸脱氢酶复合物E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2，PDC-E2)是AMA识别的主要特异性抗原，该酶的活性中心是硫辛酰区域(inner lipoyl domain，ILD)。已有研究证明蛋白质主链的环化不仅保留其原有抗原性，而且可以增加蛋白质的热稳定性和降低熵值等。将线状ILD多肽连接成一个环状ILD(cyclized ILD，cILD)，探索其在PBC患者AMA检测中的抗原性变化，目前尚未见文献报道。该研究通过内含肽介导蛋白连接技术(intein-mediated protein ligation，IPL)获取cILD，探讨cILD在PBC临床诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料

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病例资料 选择2015年11月至2020年12月在安徽医科大学第一附属医院就诊的PBC患者316例，其中男19例，女297例，均符合PBC的临床诊断标准，年龄37～78(56.835～10.000)岁。另选择34例符合类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)诊断标准的患者为疾病对照组，其中男5例，女29例，年龄24～78(56.412～9.671)岁。选择36例健康志愿者为健康对照(health control，HC)组，其中男6例，女30例，年龄40～78(54.389～12.086)岁，见表1，三组间差异无统计学意义。

表1 三组受试者性别构成及平均年龄比较结果

收集所有入选者的临床资料，并抽取静脉血分离血清后-80 ℃冻存。本研究遵循的程序符合安徽医科大学第一附属医院伦理委员会制定的关于人体试验的伦理学标准，所有患者均签署知情同意书。

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主要试剂 pTWIN1质粒、几丁质树脂、MESNA购自美国New England Biolabs(NEB)公司；……