17℃保存对猪精子亚组分蛋白酪氨酸磷酸化的影响及中药保护作用

胡启蒙，谢海霞，徐静溪，杨 乐，李秋玲

（1.廊坊师范学院生命科学学院，河北省动物多样性重点实验室，河北廊坊 065000；2.苏州大学基础医学与生命科学学院，江苏苏州 215006；3.河北师范大学生命科学学院，河北石家庄 050024）

目前，主要猪肉生产国90%以上的精子采用17℃液态保存，这种保存技术具有成本低、适应远距离运输等优点[1]，但由于细菌滋生和氧化损伤等，保存时间只有3～7 d[2]。目前17℃液态保存对猪精子功能的影响尚不清楚。

新鲜射精的精子需要“获能”才具有受精能力，其中蛋白酪氨酸磷酸化是获能指示事件，传统精子质量检测方法不能确切反映精子的受精能力。本实验在保存稀释液中添加外源性抗氧化剂（芜青Brassica rapa L./ 红花Carthamus tinctorius L./丹参Salvia miltiorrhiza Bge.水提液）、抗菌剂（广藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.水提液）及提高精子活力（菟丝子Cuscuta chinensis Lam./淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.水提液）[3]成分，旨在为解决精子保存中的氧化损伤及细菌滋生等问题[4]。精浆在精子保存中起到维持精子完整性、渗透压及提供营养等功能，但其去获能因子也会造成精子质量下降。

本文采用精子全蛋白及亚组分蛋白酪氨酸磷酸化差异来评估17℃保存效果；通过获能酪氨酸磷酸化指标分析精浆存在与否对保存精子质量的影响；利用荧光免疫定位和酪氨酸磷酸化位点差异，检测中药保护成分作用机制，为精子常温保存液培养优化奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 供试试剂 蛋白酪氨酸磷酸化一抗购于Millipore 公司，相应二抗、内参抗体GAPDH、细胞膜及胞浆蛋白分离试剂盒、细胞核及胞浆蛋白分离试剂盒等均为上海碧云天生物技术有限公司产品。……