柠檬提取物泡腾制剂的研究

王宏远，刘 丹，王 强，范兴君，王晶华，于凤波,3

(1.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011；2.牡丹江医学院附属红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011；3.广东医科大学附属高州市人民医院，广东 高州 525200)

柠檬[Citrus limon(L.)Burm.f]属芸香科柑橘属常绿小乔木，其果实提取物的药理作用广泛，有抗坏血病[1]、抗癌[2]、抗氧化[3]、抗高尿酸血症[4]、降血脂[5]、杀虫抑菌[6-7]等多种药理活性。文献报道[8-9]，柠檬提取物可以特异性作用于变形链球菌，影响变形链球菌的基因表达，同时也可以对其他致龋菌有着抑制作用，从而达到龋齿前期的防治功能。因此，可以设想，若将柠檬提取物用于漱口，则会对口腔内的致龋菌有明显的抑制作用，从而有效地防治早期龋齿的发生[10]。基于以上想法，本文开发了一种柠檬提取物泡腾制剂用于龋齿的防治，通过泡腾制剂的泡腾作用可使柠檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，从而达到抑制细菌增殖的作用。

1 材料与方法

1.1 材料无水柠檬酸(77-92-9，上海吉至生化科技有限公司)；乳糖(L1517，上海品成医药科技有限公司)；无水碳酸钠(497-19-8，湖北信康医药化工有限公司)；碳酸氢钠(144-55-8，豆城化学产品商贸(天津)有限公司)；酒石酸(526-83-0，湖北信康医药化工有限公司)；己二酸(124-04-9，佛山信航生物科技有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮(9003-39-8，上海厚诚精细化工有限公司)；甜菊素(2I43L-CP，东京化成工业株式会社)；聚乙二醇6000(25322-68-3，湖北信康医药化工有限公司)；柠檬提取物(68648-39-5，湖北巨胜科技有限公司)；氯化钠(7647-14-5，豆城化学产品商贸(天津)有限公司)。

片剂硬度仪(YD-20KZ，天大天发科技有限公司)；片剂脆碎度仪(CS-2，天津市国铭医药设备有限公司)；紫外可见分光光度计(17-1650-01-0372，北京普析通用仪器有限公司)；精密电子天平(T1000，常熟市双杰测试仪器厂)；电热真空干燥箱(ZK-82B，上海实验仪器厂)；压片机(GZPL-620，北京国药龙立有限公司)。

1.2 柠檬提取物分析方法的确立

1.2.1 波长确定 精密称取1 mg的柠檬提取物置于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，在波长为200～800 nm之间进行扫描。

1.2.2 标准曲线的绘制 精密称取500 mg的柠檬提取物于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，震荡静置后备用。用100 mL容量瓶将柠檬提取物分别稀释为浓度为1 μg/mL、3 μg/mL、5 μg/mL、7 μg/mL、9 μg/mL、11 μg/mL，分别测量吸光度A值，绘制标准曲线。

1.2.3 回收率测定 取处方量的辅料与80%、100%、120%的主药混合放入100 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解稀释定容，稀释1000倍后测量其紫外吸光度值，计算回收率。

1.2.4 精密度试验 配制相应溶液在1 d内和1周内分别测定5次，计算日内精密度和日间精密度。

1.2.5 稳定性试验 将药物溶液保存在密闭的容量瓶中，分别测定24 h与36 h样品含量。

1.3 处方设计

1.3.1 单因素筛选 在查阅资料及单因素考察实验结果基础上，确定泡腾片的填充剂使用乳糖在片剂成型与口感等方面最佳。经过筛选，初步选择出辅料种类有酸剂种类：柠檬酸、酒石酸、己二酸；润湿剂种类：5% PVP水溶液、5% PVP乙醇溶液、80%乙醇，并在如下范围内对酸碱比及泡腾剂含量进行筛选：泡腾剂含量(占片重百分比)：40%、45%、50%；泡腾剂酸碱比例：2∶3、2∶5、7∶10。

1.3.2 正交实验设计 在单因素考察基础上，以酸剂种类、泡腾剂含量、泡腾剂酸碱比与润湿剂种类为因素，以发泡量、崩解时限、脆碎度为考察指标，设计L(34)正交实验表，用于柠檬提取物的处方筛选。

经过初步筛选确定泡腾剂辅料如下，确定所用碱剂为碳酸氢钠：碳酸钠(9∶1)；填充剂：乳糖；润滑剂：PEG6000：NaCl(2∶3)，适量的微分硅胶，占处方1%；矫味剂：甜菊糖(6 g)。总混400 g压制成100片，每片的主药含量0.5 g。并按照如下工艺流程制备泡腾片：(1)配置润湿剂；(2)按处方称取原辅料；(3)制粒：柠檬提取物泡腾片的制备采用酸碱分开制粒。取处方量1/2的主药，处方量酸剂，与处方量1/2的乳糖混合研磨过60目筛，用润湿剂制软材。软材要达到手握成团捏之即散。软材过18目筛制粒，再过16目筛去细粉，放入烘干箱55 ℃烘干30 min左右至完全干燥。取1/2处方量主药，1/2处方量乳糖，处方量的碱剂重复酸制粒步骤，得到碱制粒；(4)混总：得到的酸制粒与碱制粒1∶1混合，加入处方量的润滑剂与处方量的矫味剂混合均匀；(5)压片：将混总后的制粒放于压片机压片，控制片重4 g左右。

表1 因素水平

表2 正交表

1.3.3 处方确定 按照药典标准[11]对正交实验设计的9个处方的泡腾制剂的外观与澄清度、片重差异、脆碎度、发泡量、崩解时限等进行检测，确定最佳处方。

1.4 质量检测按照正交实验所确定柠檬提取物处方及制备工艺分别制备3批次柠檬提取物泡腾制剂，并对其片剂外观与溶液澄清度、含量、片重差异、硬度、脆碎度、发泡量等质量进行检测。

2 结果

2.1 分析方法的建立结果显示，柠檬提取物在295.00 nm处有最大吸收波长。柠檬提取物在1～11 μg/mL内线性关系良好，标准曲线为A=0.056C-0.006，r2=0.999。

2.1.1 回收率测定 结果 结果显示，RSD均小于2%，表明该方法准确性良好,见表3。

表3 回收率测定结果

2.1.2 精密度测定结果 结果显示，实验精密度较好，日内与日间RSD%均小于2%，见表4。

表4 精密度测定结果

2.1.3 稳定性测定结果 结果显示，36 h内室温放置溶液稳定，见表5。

表5 稳定性测定结果

2.2 处方筛选实验结果

2.2.1 不同处方外观与溶液澄清度测定结果 结果显示，各处方片剂外观完整光泽，色泽均匀，溶液中无明显浑浊沉淀，见表6。

表6 不同处方外观与溶液澄清度测定结果

2.2.2 不同处方片重差异测定结果 药典规定平均片重0.3 g以上的片剂，各片重与平均片重相差不得超过±5%，结果显示L4、L5、L6、L7组片重差异有大于5%，不合格，见表7。

表7 不同处方片重差异测定结果

2.2.3 不同处方脆碎度测定结果 结果显示，各处方脆碎度均小于1%，满足药典规定，见表8。

表8 不同处方脆碎度测定结果

2.2.4 不同处方发泡量测定结果 结果显示，除L4、L7外，各处方均有较好发泡量，见表9。

表9 不同处方发泡量测定结果(单位：mL)

表9续表

2.2.5 不同处方崩解时限测定结果 结果显示，各处方都能在5 min内完全崩解，满足药典规定，见表10。

表10 不同处方崩解时限测定结果(单位：S)

2.2.6 处方及工艺确定 综合上述质量检测结果，以发泡量、崩解时限和脆碎度作为评价指标，对正交试验设计处方进行评价。

表11 正交实验结果

表12 主体间效应检验表格

根据正交实验结果与主题效应检验表格进行比对，得到以下结果：发泡量的因素影响顺序为B>A>D>C。崩解时限的因素影响顺序为B>D>A>C。脆碎度的因素影响顺序为D>A=B>C。

综上，最终确定柠檬提取物泡腾制剂的处方及制备工艺为：酸剂：碳酸氢钠，碳酸钠(用量为7:10)100 g；碱剂为柠檬酸100 g；润滑剂为PEG6000：NaCl(2∶3)4 g与适量微粉硅胶(约占1%)；润湿剂为5% PVP乙醇溶液；填充剂为乳糖140 g；矫味剂为甜菊糖6 g。混总共400 g压制100片。酸碱分开制粒，混总后直接压片。

2.3 质量检测结果

2.3.1 含量检测结果 随机选取三批次中的三个样本经稀释、定容后测紫外吸收，计算样品含量，结果显示，三批次产品含量均符合标准，见表13。

表13 含量检测结果(n=3)

2.3.2 脆碎度 结果显示，三批次产品脆碎度均符合标准，见表14。

表14 脆碎度检测结果(n=20)

2.3.3 硬度 结果显示，样品的硬度在(55±5)N范围内，见表15。

表15 硬度检测结果(单位：N)

2.3.4 发泡量 结果显示，三批次产品发泡量在(17±1)mL范围内，见表16。

表16 发泡量检测结果(单位：mL)

2.3.5 崩解时限 结果显示，三批次产品崩解时限在85 S左右，均低于5 min，符合药典规定，见表17。

表17 崩解时限检测结果(单位：S)

2.3.6 片重差异 结果显示，片重差异均低于5%，符合药典规定，见表18。

表18 片重差异检测结果(单位：g)

表18续表

3 讨论

本文建立了柠檬提取物的分析方法用于其含量检测，并最终确定了柠檬提取物泡腾剂处方为：酸剂：碳酸氢钠，碳酸钠(用量为7∶10)100 g；碱剂为柠檬酸100 g；润滑剂为PEG6000：NaCl(2∶3)4 g与适量微粉硅胶(约占1%)；润湿剂为5%PVP乙醇溶液；填充剂为乳糖140 g；矫味剂为甜菊糖6 g，混总压制为100片，使柠檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，用于龋齿的防治，同时通过泡腾制剂的泡腾作用可从而达到抑制细菌增殖的作用，此外，该溶液还可吞服，用于补充维生素。与市售漱口水相比，泡腾制剂具备如下优点：(1)固体片剂体型小，运输成本底，携带方便；(2)食用安全，柠檬提取物为天然植物提取物，相对安全性较高；(3)可提高消费者接受程度，通过不同矫味剂的添加，可改善天然提取物味道苦涩的问题；而龋齿高发人群多为6～15岁的儿童[10]，制成不同口味的制剂，对于儿童有更高的顺应性；(4)制作工艺简单，成本低。但泡腾制剂存在着吸潮，粘冲等问题，吸潮问题可以使用内加法，用PEG6000在制粒时对酸碱进行包埋，可有效阻止吸潮的发生。在压片时要控制温度与湿度，温度要控制在25 ℃以下，湿度在35%以下，可以有效地防止压片粘冲，本次研究制片温度为20 ℃，符合要求。氯化钠是比较好的润滑剂，并具备一定的矫味作用[11]。而选用泡腾剂是为了使药物在规定时限内完全崩解完成，酸碱泡腾剂的含量一般要占片重的50%左右才能达到快速崩解，但泡腾剂过多会影响片剂的压制与剂型外观、口感，脆碎度低等多种问题，应针对具体情况进行筛选。总之本次研究获得柠檬提取物泡腾剂配方及制备工艺符合药典规定和相关标准，可用于临床进一步观察其预防龋齿的效果。