胶体层析法与酶联免疫吸附试验在HIV抗体检测中的应用价值分析

叶晓芳，林小菊，黄 妹，李木珍

(广东医科大学附属第二医院，广东 湛江 524000)

获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)简称艾滋病，作为一种传染性疾病，由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所致，故对HIV抗体进行明确诊断有助于控制病毒传播并指导临床治疗[1-2]。目前胶体层析法、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)作为HIV抗体诊断中常用方法，以胶体层析法使用最为普遍，操作简单迅速，但亦存在诊断特异度较低等弊端，易受人为及环境因素影响[3]。近年来ELISA多被用于HIV筛查中，价格低廉且诊断准确率较高[4]。鉴于此，本研究将分析胶体层析法与ELISA在HIV抗体检测中的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2017年9月至2019年8月我院治疗的84例疑为HIV感染患者临床资料，其中女性、男性分别为49例、35例；年龄32～59岁，平均年龄(45.86±5.17)岁；文化程度：小学及以下、初中、高中、大专及以上分别为16例、23例、25例、20例。

1.2 入选标准(1)纳入标准：①临床资料较为完善者；②均与HIV携带者有性接触者，或性伴侣较多、吸毒者；③肝、肾功能良好者；④未合并免疫系统疾病者。(2)排除标准： ①存在肺结核等其他传染性疾病者；②合并血液系统疾病者；③患有精神疾病者；④伴有恶性肿瘤疾病者。

1.3 方法入选者均接受胶体层析法、ELISA检查，仪器为化学发光仪(KPS-KM型，北京科美东雅生物技术有限公司提供)、酶标仪(RT-2100C型，厦门市康鸿生物科技有限公司提供)、洗板机(RT-2600C型，深圳市雷杜电子有限公司提供)及配套微量加样器。采集入选者空腹肘静脉血6 mL，离心分离取上层清液，离心半径3 cm，3000 r/min，离心5 min，通过基因重组HIV1+2抗原包被微孔板、辣根过氧化物酶标记重组HIV1+2抗原，ELISA初检HIV抗体，北京万泰生物药业有限公司提供检测试剂盒。胶体层析法测定HIV抗体，针对样本中含有HIV1+2抗体时，抗体结合硒胶体-抗原，于患者窗口处被重组抗原、背固相包被合成肽捕捉固定，可见一条红线形成，美国雅培公司提供检测试剂盒，均连续测定7次。所有检测结果由两名或以上专业医生双盲进行评估，给出最终结果。

1.4 评价指标(1)计算胶体层析法、ELISA在HIV抗体低、高值质控血清中检出率。(2)以蛋白印迹诊断结果作为金标准，计算胶体层析法、ELISA在HIV抗体诊断中的敏感度、特异度、准确率。(3)统计阳性样本带型分布情况。

1.5 统计学方法采用SPSS 20.0软件进行数据处理，计数资料用百分比表示，采用卡方检验，计量资料以“均数±标准差”表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶体层析法、ELISA在HIV抗体低、高值质控血清中检出率对比ELISA在HIV抗体低、高值质控血清中检出率(100.00%)高于胶体层析法(57.14%)，差异有统计学意义(χ2=5.303，P=0.021)，见表1。

表1 胶体层析法、ELISA在HIV抗体低、高值质控血清中检出率对比[n(%)]

2.2 胶体层析法、ELISA诊断HIV抗体结果以蛋白印迹诊断结果作为金标准，ELISA诊断HIV抗体敏感度、特异度、一致率(93.33%、98.15%、96.43%)高于胶体层析法(73.33%、85.19%、80.95%)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2、表3。

表2 ELISA在HIV抗体中的诊断结果(n)

表3 胶体层析法在HIV抗体中的诊断结果(n)

2.3 阳性样本带型分布ELISA诊断HIV抗体阳性28例，其中条带gP120、gP160出现最高，均为100.00%，P55出现率最低，仅为32.14%，见表4。

表4 阳性样本带型分布

3 讨论

AIDS属于免疫缺陷性疾病，具有潜伏期长、危害范围广、传播速度快、死亡率高等特点[5]。HIV作为突变率较高的病毒，HIV感染后将攻击患者机体内免疫系统，导致患者免疫功能障碍，出现多器官、多系统、多病原体复合感染及肿瘤[6]。近年来受到人口流动性增大及性开放等因素影响，临床上AIDS患者占比逐渐增大，AIDS多以性接触传播为主，短时间内无典型症状，易被患者自身忽略，进而将通过其他途径传染，故有效筛查HIV抗体，有利于早期积极预防、控制AIDS[7]。

蛋白印迹法为HIV抗体诊断金标准，诊断准确率较高，但由于检测试剂成本较高，无法用于大范围HIV抗体筛查[8]。既往HIV抗体检测方法以胶体层析法为主，具有所需设备少、检查费用低廉及反应快速等优点，但相关研究发现，胶体层析法诊断中敏感性较低，易导致误诊、漏诊的发生，降低HIV抗体诊断准确率[9]。ELISA检测HIV抗体时，可将HIV抗原包被于固相载体，并将酶标记HIV抗原及待检样品加入，以底物显色，通过酶标仪测定结果，利用酶催化底物反应放大效果，促使抗原抗体反应灵敏性增强，进而提升HIV抗体检出率。ELISA检测中不受样本中溶血及脂血等影响，稳定性较高，通过酶标仪获得数据，减轻对检测结果的影响，保障检测结果准确性[10]。本研究结果显示，ELISA在HIV抗体低、高值质控血清中检出率高于胶体层析法；经蛋白印迹诊断诊断HIV抗体阳性、阴性分别为30例、54例；以蛋白印迹诊断结果作为金标准，ELISA诊断HIV抗体敏感度、特异度、准确率高于胶体层析法，同时ELISA诊断HIV抗体阳性患者中出现率最高的为条带gP120、gP160，由此可见，与胶体层析法相比，ELISA检测HIV抗体敏感度、特异度、准确率较高，可作为HIV抗体筛查有效方法，且条带gP120、gP160出现率最高，表明人群中HIV传染性较强。经临床实践发现，ELISA检测HIV抗体准确率相对较高，但受到检测中耗时长、操作繁琐及人为、环境及类风湿因子等因素干扰影响，检查中仍存在一定假阳性、假阴性，需在ELISA检测中选取灵敏度高、特异性好的试剂，加强室内质控，降低漏检风险，提升HIV抗体检出率。

综上所述，ELISA在HIV抗体检测中准确率较高，利于提升低、高值质控血清中检出率，显示阳性样本带型分布，可作为HIV抗体筛查准确方法。