lncRNA MALAT1在正常妊娠和子痫前期患者中的表达差异及临床意义

张冬梅，杨丽丽，李 铮，张会敏

(河北省唐山市妇幼保健院产科，河北 唐山 063000)

子痫前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有的并且较常见的多系统受累疾病，主要症状为妊娠中后期高血压(≥140/90mmHg)、蛋白尿以及各系统功能紊乱，是导致孕产妇及胎儿死亡的诱因之一[1]。尽早发现PE高危的孕妇并给予有效监护后，对于改善妊娠结局有重要意义[2]。有研究表明孕妇血清中促血管生成因子血小板衍生生长因子-B(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)、胎盘生长因子(placental growth factor，PLGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和人可溶性FMS样酪氨酸激酶1(soluble fms-like tyrosine kinase 1，sFlt-1)与PE有一定的相关性[3-4]，但PE诊断尚缺乏有效的预测标志物。近年来有研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)肺腺癌转移相关转录产物-1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)与肿瘤血管生成以及各炎症反应相关[5]。因此，本研究探究lncRNA MALAT1在正常妊娠和子痫前期患者血清和胎盘组织中的表达差异，以及lncRNA MALAT1与血清学指标以及临床治疗的相关性，为后期临床子痫前期高危患者提供新的预测指标。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2018年1月至2020年12月于河北省唐山市妇幼保健院建档并分娩的87例子痫前期患者为实验组，另选取本院同期分娩的48例健康孕妇为对照组。纳入标准：①PE患者均符合《妇产科学》第9版中子痫前期的诊断标准；②单胎妊娠；③年龄20～40周岁，初产或经产妇；④在本院建档，临床产检资料完整。排除标准：①有心脏病、糖尿病或妊娠期糖尿病、肾病病史患者；②合并精神疾病患者；③自身免疫性疾病患者；④有结核或肝炎传染性疾病患者。本次实验所有受试者均签署知情同意书，并通过本院伦理委员会批准。根据实验组患者PE的严重程度，将所有患者分为轻度组(n=47)和重度组(n=40)。

1.2研究方法

收集所有受试者年龄、孕周、体质量指数(body mass index，BMI)、血压、24h尿蛋白、新生儿体重等临床资料。

1.2.1 ELISA法检测PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表达

所有受试者孕24周时空腹12h后清晨采取静脉血10mL，3 000rpm离心15min后留取血清。采用ELISA法检测血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表达情况，严格按照试剂盒步骤操作。PDGF-BB试剂盒购自上海臻科生物科技有限公司，PLGF试剂盒购自上海研生实业有限公司，VEGF、sFlt-1试剂盒购自泉州九邦生物科技有限公司。

1.2.2 RT-PCR检测血清和胎盘组织lncRNA MALAT1表达

采用TRIzol法(Invitrogen，美国)提取产妇胎盘组织和血清总RNA，通过琼脂糖凝胶及分光光度计鉴定总RNA的浓度和纯度，A260/A280位于1.7～2.1时可进行RNA反转录；采用Promega反转录试剂盒取1μg将总RNA反转录为cDNA；RT-PCR检测lncRNA MALAT1表达，严格按照SYBR Green PCR试剂盒(天根生物科技有限公司)操作。lncRNA MALAT1上游引物：5′-GGGTGTTTACGTAGACCAGAACC-3′，下游引物：5′-CTTCCAAAAGCCTTCTGCCTTAG-3′；内参为GAPDH，上游引物：5′-AACTTGGTATCGTGGAAGG-3′，下游引物：5′-GCCATCACGCCACAGTTTC-3′；扩增程序：95℃预变性5min，95℃变性15s，60℃退火35s，72℃延伸20s，进行40个循环，每个实验设置3个复孔，反应结束后计算lncRNA MALAT1的相对表达量。

1.3统计学方法

2结果

2.1不同组孕妇临床资料及妊娠结局比较

不同组孕妇年龄、孕次、产次以及孕前BMI比较差异无统计学意义(P>0.05)；PE患者收缩压、舒张压、24h蛋白尿显著高于对照组，且重度PE患者显著高于轻度PE患者，差异有统计学意义(F值分别为162.300、198.490、43.380，P<0.05)；PE患者生产孕周、新生儿体重均显著低于对照组，差异有统计学意义(F值分别为12.283、43.389，P<0.05)，见表1。

表1 不同组孕妇临床资料及妊娠结局比较Table 1 Comparison of clinical data and pregnancy outcomes of the pregnant women among different groups

2.2各组血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表达差异性

PE组PDGF-BB、sFlt-1水平显著高于对照组，且重度PE患者显著高于轻度PE患者，差异有统计学意义(F值分别为56.483、67.485，P<0.05)；PE组PLGF、VEGF水平显著低于对照组，且重度PE患者显著低于轻度PE患者，差异有统计学意义(F值分别为102.384、19.382，P<0.05)，见表2。

表2 不同组血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF水平差异Table 2 Differences in serum levels of PDGF-BB,PLGF,sFlt-1 and VEGF ofthe pregnant women among different

2.3各组血清和胎盘组织lncRNA MALAT1表达差异性

与对照组相比，PE患者血清及胎盘组织中lncRNA MALAT1表达显著降低(血清：F值分别为5.663、12.845，P<0.05；胎盘组织：F值分别为9.758、23.365，P<0.05；)，且重度PE患者显著低于轻度PE患者，差异有统计学意义(F值分别为6.586、11.347，P<0.05)，见图1。

2.4血清lncRNA MALAT1与血清学检测指标的相关性

血清lncRNA MALAT1与血清PDGF-BB、sFlt-1呈负相关，与血清PLGF、VEGF水平呈正相关(r值分别为-0.789,-0.674、0.567、0.785，P<0.05)，见表3。

表3 血清lncRNA MALAT1与血清学检测指标的相关性Table 3 Correlations of serum lncRNA MALAT1with serological indicators

注：A为血清；B为胎盘组织；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

2.5 ROC曲线评估血清lncRNA MALAT1对PE的诊断价值

lncRNA MALAT1诊断PE的ROC曲线下面积为0.829，95%CI为0.755～0.903；敏感度、特异度分别为80.5%、79.2%，Youden指数为0.596，见图2。

图2 lncRNA MALAT1诊断PE的ROC曲线Fig.2 ROC curve of lncRNA MALAT1 for diagnosis of PE

3讨论

子痫前期是妊娠期较为常见的血管性疾病，其发病率约为4%～8%，可导致胎儿发生宫内窒息以及宫内生长受限，对孕产妇和胎儿健康产生严重影响[6]。与正常妊娠者相比，PE患者通常存在高血压、蛋白尿等，该结果在本次研究中也得以体现。另外，PE患者的不良妊娠结局发生率较高，本研究中发现PE患者更容易早产，且新生儿体重显著降低，因此子痫前期的治疗仍是临床医学亟需解决的问题。

3.1子痫前期患者PLGF、VEGF水平较低，PDGF-BB、sFlt-1水平较高

PE的发生机制尚未完全明确，但胎盘功能不全在先兆子痫的病理生理中起着重要作用。妊娠早期异常胎盘形成导致子宫血管重构缺陷，胎盘灌注不足以及滋养层功能障碍，进而在母体循环中释放滋养层因子，导致过度炎症反应、内皮功能障碍和肾小球损伤[7]。VEGF参与血管形成过程，并对于维持内皮功能有重要作用，Zhou等[8]人发现①VEGF在胎盘组织的滋养细胞、血管内皮细胞和毛细血管中均有表达；②子痫前期患者血清VEGF水平较正常孕妇明显降低，但胎盘组织VEGF mRNA表达较高；③VEGF缺乏可导致内皮功能紊乱，可能促使子痫前期的发生和发展。在本次研究中我们同样发现与正常妊娠孕妇相比，PE患者血清VEGF表达较低，且重度PE显著低于轻度PE患者。PLGF是VEGF家族成员之一，在诱导血管内皮细胞增殖、迁移以及促进血管新生中发挥重要作用，与滋养细胞增殖和侵袭也密切相关[9]。sFlt-1竞争性结合VEGF，促使血管生成障碍，并使血管壁的通透性和完整性受到影响。既往的研究报道称血清sFlt-1水平与VEGF、PLGF呈负相关，并且PE患者sFlt-1水平显著升高[10]，与本研究结果具有一致性。PDGF-BB在组织损伤早期从血小板中释放出来，引起血管收缩，其与血管功能以及炎症反应也有一定的相关性。研究表明PE患者胎盘蜕膜血管中PDGF-BB mRNA表达上调，阻碍胎盘重构，造成局部缺血[11]。有学者通过实验证实PE患者血清PDGF-BB水平高于正常妊娠孕妇[3]，本次研究中同样发现重度PE患者PDGF-BB显著高于轻度PE患者，轻度PE患者显著高于正常孕妇。

3.2子痫前期患者血清和胎盘组织中lncRNA MALAT1均表达下调

在本研究中发现血清和胎盘组织中lncRNA MALAT1均表达下调，并且与血清PDGF-BB、sFlt-1水平呈负相关，与PLGF、VEGF水平呈正相关。进一步通过ROC曲线评估血清lncRNA MALAT1对于PE的诊断价值，结果发现ROC曲线下面积为0.829，敏感度、特异度分别为80.5%、79.2%，该结果提示lncRNA MALAT1对PE具有一定诊断价值。其作用机制较为复杂，Zhou等[12]人发现lncRNA MALAT1可以通过抑制miR-590功能促进STAT3介导的内皮炎症；Wei等[13]人实验表明沉默lncRNA MALAT1通过p30下调IL-8预防肺移植缺血再灌注后的炎症性损伤；Tang等[14]人发现lncRNA MALAT1通过上调miR-22-3p靶基因CXCR2和AKT的表达，保护内皮免受氧化低密度脂蛋白诱导的功能障碍；另有研究表明lncRNA MALAT1在PE患者胎盘组织中低表达，且lncRNA MALAT1水平降低时，能诱导上皮-间叶细胞转化发生，引起滋养细胞侵袭能力减弱，血管生成减少，进一步导致紫红螺旋动脉重构损伤加重[15-16]。

综上，子痫前期患者PDGF-BB、sFlt-1水平较高，PLGF、VEGF水平较低，其血清和胎盘组织中lncRNA MALAT1均表达下调。后期我们将进一步通过细胞实验探究lncRNA MALAT1与miRNA对PE诊断的联合分析，以及lncRNA MALAT1对滋养细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响，探究其参与子痫前期的发病机制。