基因编辑治疗视网膜疾病的研究进展

周紫依 游志鹏

视网膜疾病可以是遗传来源或多危险因素共同作用的结果。遗传性视网膜营养不良(IRD)是一种罕见的遗传性视网膜疾病，可由280多种基因突变引起，除线粒体遗传外，还以常染色体显性、隐性或X连锁方式遗传，均可导致功能性视力丧失，并常常发展为失明[1]。迄今为止，临床上最先进的IRD基因治疗方法是采用基因扩增策略，将突变基因的野生型(WT)cDNA包装在腺相关病毒(AAV)载体或慢病毒(LV)载体中，并将该载体转运入视网膜中。目前至少有10种不同的基因增强疗法正处于临床试验中，并且发展迅速[2]。

然而，提供突变基因正常拷贝的基因增强疗法仅适用于治疗单倍体功能不足或功能缺失的突变，并不能直接影响致病基因。成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关核酸酶(Cas)系统(CRISPR/Cas)是最有效且通用的基因编辑工具，能简单地将Cas核酸酶与控制基因组位点识别的RNA结合起来，有直接纠正患者DNA中的突变或抑制显性突变表达的可能。Cas9/gRNA复合物通过在特定位点切割DNA，触发2种修复机制：同源介导修复(HDR)和非同源末端连接(NHEJ)。在外源性供体DNA存在的情况下，基因组中的突变可以通过HDR来替代/纠正。而NHEJ作为一种普遍的修复过程，通过在目标位点引入错误序列导致致病基因失活。基因编辑的发展异常迅速，CRISPR/Cas系统加速了基因编辑的革命。

1 CRISPR/Cas系统的来源与发展

20世纪90年代，研究人员在细菌与古菌内发现了CRISPR/Cas系统，其为一种依赖于小RNA的适应性防御系统，可特异性检测和沉默入侵质粒和病毒的核酸。……