抑制miR-155对心肌缺血/再灌注模型心肌细胞凋亡及炎性反应的影响

朱新华，刘蓓蓓，侯静雯，李秋影，许慧娟，张晓阳

(新疆医科大学第五附属医院 老年病科，新疆 乌鲁木齐 830000)

心肌缺血/再灌注(myocardial ischemia-reperfusion，MI/R)损伤是心血管手术并发症(如心律失常)、心肌细胞凋亡及心功能下降等发生的重要原因[1]。目前，微小RNA(microRNA，miRNA)在心血管疾病发生发展过程中发挥重要作用[2]，其中miR-155在调节免疫、炎性反应和心血管疾病的发生发展过程中具有重要作用[3]。有研究表明，抑制miR-155的表达可减轻急性心肌梗死后的炎性反应，并有利于减轻心室重构[4]。因此，本研究探讨抑制miR-155对心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及炎性反应的影响，为临床治疗心肌缺血/再灌注提供新的治疗靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验主要试剂：大鼠心肌细胞系H9c2(myocardial cells of H9c2 rats)；叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide，TBHP)；DMEM培养基(Sigma-Aldrich公司)；miR-155抑制剂及NC抑制剂(广州锐博生物技术有限公司)；Trizol、Lipofectamine 2000(Invitrogen公司)，RT-qPCR引物[生工生物工程(上海)股份有限公司]；核转录因子p65(nuclear factor-κB p65，NF-κB p65)小鼠单克隆抗体、核转录因子p50(nuclear factor-κB p50，NF-κB p50)小鼠单克隆抗体、磷酸化核转录因子p65(phospho nuclear factor-κB p65，p-NF-κB p65)小鼠单克隆抗体、磷酸化核转录因子50(phospho nuclear factor-κB p50，p-NF-κB p50)小鼠单克隆抗体、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)小鼠单克隆抗体、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)小鼠单克隆抗体、β肌动蛋白(β-actin)小鼠单克隆抗体、山羊抗小鼠二抗(Santa Cruz公司)；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(上海贝博生物科技有限公司)；白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)ELISA检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.1.2 细胞处理及分组：将H9c2细胞分为4组：空白对照组、心肌缺血/再灌注(MI/R)组、阴性对照组、miR-155抑制剂组。TBHP用DMEM高糖培养基为溶剂进行溶解并稀释成浓度为100 μmol/L的TBHP溶液，根据参考文献[5]采用TBHP处理H9c2心肌细胞构建MI/R模型：将细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，置于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养。……