胃癌中CX43表达及与mTOR/p70S6K信号通路的关系

刘莎莎，赵 杨，赵 醒，刘 欢，申兴斌

胃癌是全球范围内发病率及病死率均较高的恶性肿瘤，严重影响着人类的健康[1]。我国胃癌临床诊治特点是中晚期多见，以手术治疗为主，术后化疗+靶向治疗为辅，患者存活期短[2]。目前临床上用于治疗胃癌的靶向药物较少，迫切需要寻找新的治疗靶点。有研究发现，连接蛋白43(connexin 43, CX43)介导的细胞间隙连接(gap junction intercellular communciation, GJIC)在肿瘤中的表达水平和膜定位可影响癌细胞的增殖、侵袭及转移[3]。在恶性肿瘤中，PI3K/AKT/mTOR通路的异常活化可抑制肿瘤细胞的凋亡并促进肿瘤细胞增殖及新生血管的形成[4]。其中下游mTOR/p70S6K信号通路被异常激活后，可使磷酸化的p70S6K转录和翻译活性增强，促进细胞G1期→S期的转换，导致肿瘤细胞的无限生长及增殖。CX43是否直接或间接地通过与mTOR/p70S6K的相互作用参与调节胃癌的发生、侵袭、转移过程，目前尚未见报道。本文采用免疫组化法、Western blot法及qRT-PCR技术检测CX43、mTOR和p70S6K蛋白及mRNA在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达，并分析其相关性，为研究胃癌的发病机制及靶向治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 一般资料收集承德医学院附属医院存档的60例胃癌手术切除标本(患者术前均未行放疗及化疗)及相应癌旁正常胃黏膜组织(距癌灶5 cm以上)，一部分新鲜组织置于-80 ℃冰箱保存用于Western blot及qRT-PCR实验，另一部分组织制成蜡块用于免疫组化染色。

1.2 免疫组化

1.2.1主要试剂 一抗兔抗人CX43多克隆抗体及mTOR单克隆抗体均购自杭州华安生物公司，兔抗人p70S6K多克隆抗体购自武汉ABclonal公司，免疫组化试剂及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。……