结肠癌中ASPM对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

安晓静，柏苗苗，谢振年，伍志强，赵 坡

结直肠癌的侵袭和复发是影响预后的主要因素。目前，对于结肠癌的转移和复发仍缺乏长期有效的治疗方法。寻找抑制结肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的靶点对于缓解疾病意义重大。头小畸形相关基因(abnormal spindle-like microcephaly associated, ASPM)是肿瘤干细胞标志物，在多种实体肿瘤中发挥促癌基因作用[1-2]。在前期研究中发现ASPM在结肠癌组织中表达升高，与结肠癌组织中β-catenin的表达呈正相关[3]。但尚未在体外实验中探讨ASPM对结肠癌细胞生物学性能的影响。本文通过体外实验观察ASPM对结肠癌细胞生物学行为的影响及对β-catenin的调节，为结肠癌靶向治疗和改善预后积累研究数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞系 人源结肠癌细胞株SW116、HCT116、HT29、DLD1、SW620和LS180均来自中国人民解放军总医学院第一医学中心生物治疗科。

1.1.2试剂 Trizol试剂、反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒购自Gibco公司；DMEM培养基、胎牛血清、Lipofectamine 2000转染试剂盒购自Invitrogen公司。CCK8试剂盒购自碧云天生物公司；Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡试剂盒购自三箭生物公司；ASPM抗体购自Lifespan公司，β-catenin抗体购自Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1细胞培养与转染 将细胞复苏后使用含10%FBS的DMEM培养基，在5%CO2、37 ℃细胞培养箱中常规传代培养，选择处于生长对数期的细胞作为研究对象。

细胞转染：选取生长状态较好的结肠癌细胞进行转染。首次转染带有荧光标记的阴性对照组，荧光显微镜下观察细胞转染情况，转染率达80%以上即可。计数细胞密度后接种于6孔板中，按照转染试剂盒说明书进行操作，siRNA-NC转染组为阴性对照(negative control, NC)组。将siRNA-ASPM转染入细胞48 h后，采用qRT-PCR技术检测细胞中ASPM的表达，选取两种沉默效果较好的siRNA序列作为后续实验，设为siRNA1组和siRNA2组。……