过表达FAK对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖及侵袭的影响

陈 凯，李张维，廖晓颖，康成容，龚 攀

舌鳞状细胞癌是口腔颌面及头颈部位最常见及发病率最高的一种实体恶性肿瘤[1-2]，其具有较强的局部浸润、侵袭及颈部淋巴结转移等生物学特征。目前，现有的治疗疗效均较差[3]，患者5年生存率仅为50%～60%[4-5]。

黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)作为非受体型的酪氨酸激酶的一种类型，在正常生理状态下发挥调节细胞之间、细胞与胞外基质之间黏附作用；与整合素蛋白构成复合体后，又可在细胞生理活动的调控方面发挥作用。已有研究和实验揭示，FAK表达变化与人恶性肿瘤细胞的生长及转移关系密切。但以往文献报道大多局限于临床病理相关性的研究，尚缺乏在细胞水平对其具体功能和机制的研究。本组前期实验结果证实，下调舌鳞状细胞癌细胞中FAK的表达量，可有效影响肿瘤细胞的多项功能[6-7]。为更深入地揭示FAK在舌鳞状细胞癌细胞生长、转移过程中的作用，本实验构建了FAK基因过表达载体，培养高表达FAK的舌鳞状细胞癌CAL-27细胞株，探讨FAK高表达对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭能力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27由中山大学附属第二医院李劲松教授惠赠。DNA聚合酶试剂盒、Kpn I和BamH I限制性内切酶、DNA连接酶试剂盒、Lipofectamine 2000购自Themro Seientific公司；噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司；凝胶纯化试剂盒购自Qiagen公司；GoScript Reverse Transcription System购自Promega公司；GoTaq qPCR Master Mix试剂盒购自Promega公司；Trizol试剂盒购自TIANGEN公司；FAK单克隆抗体(兔抗)购自英国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1舌鳞状细胞癌细胞的培养 筛选低转移CAL-27细胞株，在10%胎牛血清的培养基中接种培养挑选的舌鳞状细胞癌细胞至对数生长期(培养箱环境设定为37 ℃ 5%CO2)，行下一步实验。……