芒柄花黄素对喉癌TU686细胞生长、增殖和凋亡的影响

刁玉佩，李 萍，郭明坤，王 乐

喉具有发声、吞咽、呼吸等关键作用，喉部发生病变将会给患者带来严重的生理障碍及心理负担。因此，喉癌被称为高度精神创伤性癌症[1]。其发病率呈逐年上升的趋势，虽然目前的治疗手段在一定程度上能延长患者生存期，但存在副作用明显、预后效果差、5年生存率低、患者生活质量低等问题[2]。因此，在提高患者生存率的前提下，寻找安全有效的喉癌治疗方法具有重要意义。芒柄花黄素(formononetin, FMN)，别名刺芒柄花素，是一种天然异黄酮，在保肝[3-4]、降糖[5]、抗炎[6]、抗肿瘤[7-8]等方面具有重要作用。FMN对多种癌细胞具有显著的抑制作用，本文应用体外实验检测FMN对喉癌细胞的影响，探讨其对肿瘤细胞的抑制作用及诱导细胞凋亡的可能机制，为喉癌的临床治疗提供新线索。

1 材料与方法

1.1 细胞人喉癌TU686细胞(贴壁生长)购自中国科学院上海细胞研究所，采用含有10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基在37 ℃ 5%CO2条件下培养。

1.2 主要试剂FMN(上海佳和生物公司)；RPMI 1640、10%胎牛血清、青霉素-链霉素双抗(美国Gibco公司)；PBS缓冲液、0.25%胰蛋白酶、0.1%结晶紫水溶液、4%多聚甲醛(上海阿拉丁生化公司)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)测定试剂盒、丙二醛(malondialdehyde, MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；线粒体膜电位荧光探针JC-1(美国AAT Bioquest公司)；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量检测试剂盒、细胞计数(CCK-8)试剂盒、RIPA裂解液及实验中相关抗体(武汉赛维尔生物公司)。

1.3 主要仪器Navios流式细胞分析仪(美国Beckman Coulter公司)；ECO1.8超净工作台、CO2培养箱，T25培养瓶(美国Thermo Scientific公司)；D3024R低温高速离心机(大龙兴创实验仪器公司)；……