苦参碱通过Pink1/Parkin途径抑制线粒体途径促进肝癌细胞凋亡的机制*

何 敏，岳鹏莹，白宝平

延安大学西安创新学院，陕西 西安710100

肝癌是消化系统最常见的肿瘤之一，具有恶性程度高，手术效果差，预后差的特点［1-2］。我国肝癌发病率居世界前列［3］。据流行病学统计，我国每年肝癌的发病率为11%，并且有逐年增长趋势［4］。目前针对肝癌的治疗主要集中于放、化疗及手术和介入治疗［5-6］。

中药具有毒副作用小，疗效温和的特点，对于身体状况较差的晚期癌症患者具有更佳的疗效［7-8］。苦参碱是豆科植物苦参的主要成分，对慢性炎症、心率失常及肝脏纤维化具有明显疗效，但是对于肝癌的治疗效果不明确［9-11］。本研究探讨苦参碱对肝癌的治疗效果及对肝癌细胞系HepG2的增殖和凋亡作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与药物Transwell试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；CCK-8检测试剂盒（美国BD生物试剂有限公司）；AV-PI凋亡检测试剂盒（美国BD生物试剂有限公司）；DMEM培养液（美国Gibco生物试剂公司）；胎牛血清（美国Gibco生物试剂公司）；兔抗人Pink1（美国Abcam生物有限公司）；Parkin抗体（美国Abcam生物有限公司）；Pink1、Parkin、Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9引物（上海生物化学有限公司设计并提供）；NSC 66389型3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine，3-MA，上海易汇生物科技有限公司)。苦参碱（北京伊塔生物科技有限公司，规格：20 mg；纯度：HPLC≥98%）。

1.2 方法

1.2.1 肝癌细胞系HepG2的培养人源性肝癌细胞系HepG2受赠于北京大学生命科学学院杨回清博士，培养基选择DMEM培养基，加入15%胎牛血清和1%链霉素，置于5%CO2、37℃细胞培养箱，待细胞形态规则，传代稳定后进行后续实验。

1.2.2 细胞分组根据苦参碱的处理方法将肝癌细胞分成4组。……