缩泉丸药效部位GC-MS分析*

谢 娟，何席呈,2，吴珊珊,2，李 玮,2

(1 贵州中医药大学药学院，贵州 贵阳 550025；2 贵州中医药大学中药新型饮片研究中心，贵州 贵阳 550025)

“缩泉丸”出自《妇人良方》，由盐益智仁、乌药、山药组成，其中盐益智仁温补脾肾、涩精缩尿；乌药温膀胱助气化止小便频数；山药健脾补肾；中医药理论认为肾气健，则寒邪去，膀胱功能才能复常；因此其能补肾缩尿。临床应用广泛，目前SFDA已经批准9个药企生产不同规格的缩泉丸主治膀胱虚寒证，症见尿量增多，小便频数或遗尿[1-6]。但缩泉丸用药剂量较大，给患者服用带来了不便。课题组前期通过在体和离体实验研究表明缩泉丸“缩尿”药效物质基础为石油醚提取物，能够有效的提高给药浓度，减少药物的服用[5-6]。本文为了保证药效部位质量稳定性，利用GC-MS建立缩泉丸药效部位指纹图谱，并进行了益智仁和山药的峰的归属，从而保障缩泉丸石油醚提取物质量的稳定性。

1 仪器与试药

Agilent7890A/5977A GC-MS联用仪，HP-5 ms ULTRA Inert毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，Database/NIST11.L数据库。

益智仁饮片购自海南，乌药和山药饮片均购自贵阳，经贵州中医药大学标本馆刘晓龙老师鉴定均为正品药材。

2 实验方法与结果

2.1 试液的制备

分别按药典规定处方比例1:1:1的益智仁、乌药和山药混合的缩泉丸，再分别用8 倍量乙醇回流提取2 次，每次提取1 h，过滤，合并滤液，减压浓缩，至0.5 g生药/mL，用3倍石油醚(60～90 ℃)萃取4次，即得石油醚部位，所得石油醚部位再减压回收，加入乙酸乙酯5 mL溶解，备用。

2.2 GC-MS分析条件

色谱条件：升温程序为80 ℃保持4 min，以10 ℃/min 的速率升温至120 ℃，以4 ℃/min 的速率升温至150 ℃，以1 ℃/min 的速率升温至160 ℃，以2 ℃/min 的速率升温至170 ℃，以 4 ℃/min的速率升温至220 ℃，以5 ℃/min的速率升温至 280 ℃，保持10 min。进样口温度为250 ℃；恒定流量 1.0 mL·min-1；载气为氦气，纯度为99.999%；进样体积 0.2 μL，后进样口，不分流进样，溶剂延迟4 min。

质谱条件：质谱仪Agilent 5977A，EI离子源，碰撞能量 70 eV，温度230 ℃；接口温度260 ℃，四级杆温度150 ℃；正离子模式；扫描范围为m/z 50～500。数据库Database/Nist 11.L。

2.3 方法学验证

2.3.1 精密度试验

取同一批样品，按“2.2”项色谱条件，连续进样5次，记录各共有峰的峰面积和色谱峰的保留值。结果各共有峰相对峰面积RSD为2.46%，相对保留时间RSD为4.02%，表明仪器精密度良好。

2.3.2 重复性试验

取同一批样品，按“2.2”项色谱条件，按“2.1”项下方法平行制备5份供试品溶液，进样测定，记录各共有峰的峰面积和色谱峰的保留值。结果各共有峰的相对保留时间RSD为3.55%，相对峰面积RSD为3.71%，说明方法重复性良好。

2.3.3 稳定性试验

取同一批样品，按“2.2”项色谱条件，按“2.1”项下方法制备样品溶液，分别于0，2，4，8，12，24，48 h进行测定，记录各共有峰的峰面积和色谱峰的保留值。结果各共有峰的相对保留时间RSD为3.28%，相对峰面积RSD为3.19%。说明被分析的各成分在48 h内稳定。

2.4 共有模式的建立

数据处理参考前期发表的文献方法[7]，数据格式首先通过DataAnalysis进行转化，利用软件进行数据解析，提取各峰的保留时间、响应值和质荷比。通过自编程序计算相对标准时间和相对峰面积，再用Origin软件生成GC-MS指纹图谱共有模式，见图1。

图1 缩泉丸石油醚提取物指纹图谱共有模式(标准指纹图谱)

2.5 相似度分析

采用相关系数(rcor)和夹角余弦(rcon)进行相似度评价。结果各批次样品指纹图谱与共有模式指纹图谱峰面积相似度皆大于0.90，表明相似度良好，结果见表1。

表1 相似度分析结果

2.6 峰的归属和指认

2.6.1 峰的归属

通过乌药石油醚部位和益智仁石油醚部位图谱进行峰的归属，结果生成缩泉丸指纹图谱共有模式中标定37个峰，其中1、11、12、25、31、32、34、35、36、37共10个峰为乌药中的成分，其余27个为益智仁中的成分，见图2、图3。

图2 乌药石油醚提取物指纹图谱

图3 盐益智仁石油醚提取物指纹图谱

2.6.2 峰的指认

使用Nist 11.L标准质谱谱库进行检索，并结合查阅相关的文献资料，通过标准图谱的对比进行共有峰鉴定，以28号峰为内参通过峰面积归一化法计算各组成的平均相对百分含量，结果见表2。

表2 缩泉丸石油醚部位中的共有成分及其相对质量分数

续表2

3 结 论

目前GC-MS发展成熟，技术运用广泛，中药中也常运用GC-MS对挥发油或其他极性较小的成分进行检测[8-11]。因缩泉丸缩尿有效部位为石油醚提取物，多为沸点较低的成分，故实验选择GC-MS技术进行检测，并通过数据库和参考文献进行比对分析，对共有峰进行鉴定，完善对缩泉丸药效部位的质量控制。

经GC-MS分析，挥发性成分共有模式共鉴定37个成分，其中28号内参峰为圆柚酮，主要还包括α-菖蒲醇(65%)、长叶松香芹酮(28.53%)、γ-石竹烯(28.2 %)、α-人参烯(13.68%)等。缩泉丸缩尿部位37个成分中10个来自乌药，27个来自益智仁，从物质基础方面一定程度上解释了益智仁作为君药的科学性。