不同固定液在细胞蜡块技术中的应用

黄丽芬 韦花媚 陆小婵 曾冬云 黄海宁

摘要：目的 研究不同固定液在细胞蜡块技术中的应用。方法 使用目前较为常见的三种不同的固定液对同一阳性涂片浆膜腔液体进行处理并制成细胞蜡块，对细胞蜡块开展HE染色以及免疫组织化学染色，通过对比三种不同固定液作用下的切片效果以及抗体标记情况，综合分析其应用效果。结果 10%中性福尔马林作为固定液时HE染色最为清晰，能够看到完好的细胞形态，免疫标记定位情况准确;无水乙醇作为固定液时HE染色清晰度不佳，少部分细胞发生变性，免疫标记定位情况一般;甲醇作为固定液时HE染色清晰度不佳，大部分技术中的应用效果发现10%中性福尔马林作为固定液的应用效果最好，可以作为制作细胞蜡块的首选固定液。

关键词：固定液;细胞蜡块;应用效果

【中图分类号】Q26 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）03--01

临床上病理学诊断的常用方法为脱落细胞学检查，即将脱落细胞学标本制成细胞蜡块，通过观察细胞形态以及免疫标记定位细胞的方法分析患者的病情，具有迅速、便捷、创伤小等优点，已成为病理检查常规方式[1-2]。以往针对脱落细胞检查，临床多采取传统细胞学涂片，该技术常因细胞量不足、细胞易出现退变、结构不清等因素，增加细胞学诊断难度[3-4]。目前薄层液基因细胞学检查，虽可改善传统细胞学的制片质量，但该检查方式处理的细胞样本不易获得细胞排列方式与背景对照细胞，造成难以鉴别可疑与高分化癌细胞、反应性间皮细胞与间皮瘤[5]。近年来，随着分子病理检测技术、免疫组化抗体检测不断发展，体腔积液样本可提供更多新型检查方式，细胞蜡块技术的应用显著提升了病理诊断的敏感性与特异性，其可明确积液中细胞成分分化来源与性质，也可为后续相关检测提供源源不断的样本数量，以此为靶向治疗提供有效的理论依据，具有较为显著的应用价值【6-7】，但细胞蜡块制作使用的固定液种类较多，现在同一个标本上使用多种固定液制定细胞蜡块，通过对比不同固定液下细胞蜡块的切片效果以及抗体标记情况，综合分析其应用价值。

1资料与方法

1.1一般资料

抽取2019年1月到6月间我院病理科肿瘤性胸腹水1例，选取细胞学涂片经过病理诊断确定可见癌细胞。

1.2方法

1.2.1细胞蜡块制作方法

取适量细胞学涂片诊断可见癌细胞的腹水并使用三个尖底离心管各抽取50毫升，在3000r/min的转速下进行3min的离心处理，将上层清液去除。针对细胞量较少的腹水可以进行多次离心处理，并保留沉淀物。针对血性标本，在制作细胞蜡块前需要去除红细胞，首先将血性标本放置在离心管内进行离心处理，将上层清液去除后加入适量冰醋酸酒精液不能并再次离心处理，离心完成后将上层清液去除并加入适量固定液（三个试管内分别加入不同的固定液）。加入固定液后混合均匀并放置一小时，使用吸管抽取离心管底部的细胞并放置在显微镜擦镜纸上，包装完成后放置在自动脱水机内进行组织处理，将处理好的组织块进行常规石蜡包埋，制成细胞蜡块。

1.2.2切片与烤片

细胞蜡块在冰箱冷冻室内放置5到10分钟后进行常规切片，切片的厚度为4um，最后在65摄氏度的烤箱内进行烤片1.5小时。

1.2.3 HE染色及免疫组织化学染色

对其中一张切片进行常规HE染色，其余切片则根据不同的需求进行免疫组织化学抗体染色。

2结果

2.1三种不同固定液作用下细胞蜡块HE切片情况

10%中性福尔马林作为固定液时HE染色最为清晰，显微镜观察下能够清楚的看到细胞的排列方式以及分布情况，细胞轮廓及形态清晰可见，肿瘤细胞与周围的细胞形态学存在明显差异。无水乙醇作为固定液时HE染色清晰度不佳，显微镜观察下难以有效观察细胞的排列方式以及分布情况，细胞轮廓及形态不易辨认，肿瘤细胞与周围细胞的形态学之间存在一定差异。甲醇作为固定液时HE染色情况与95%乙醇类似，清晰度较低，难以有效辨别细胞形态，部分细胞发生变性，细胞核体积增大或者固缩。

2.2三种不同固定液作用下免疫组化标记结果

三种不同固定液作用下肿瘤细胞检验结果均为阳性，免疫标记定位效果最好的是10%中性福尔马林作为固定液时的细胞切片，无水乙醇与甲醇作用固定液时细胞切片的染色效果以及免疫标记定位效果相对较差，但仍可辨认出肿瘤细胞。

3讨论

肿瘤性胸腹水在临床较为常见，主要是指发生在全身或腹腔中的肿瘤与（或）病变引起的胸腔、腹腔的脏层与（或）壁层胸腹膜发生弥漫性病变，进而造成体腔中液体异常增多的现象[8]。病理诊断中常用的细胞学制片方法有细胞涂片以及液基细胞学制片两种，细胞涂片具有操作简单，耗时短的优点，是几乎所有病理科均常规开展的项目，但其采集细胞量较少，涂片过程中易出现厚薄不均的问题，因此细胞涂片下病理诊断的诊断效果受到多种因素的影响，出现误诊与漏诊的概率较高。液基细胞学制片解决了细胞涂片中的常见问题，提升了制片的质量，但液基细胞学制片技术破坏了细胞排列方式，导致肿瘤细胞的鉴别难度增加，而且液基细胞学制片对医疗设备的要求较高，大部分的医院尚未落实使用[9]。细胞蜡块制作有效结合了上述两种细胞学制片技术的优点，具有保存细胞新鲜、抗原保留完整等优点，在不破坏细胞排列方式的同时最大程度的提高了细胞采集量，且可进行多次切片，用于分子检测、免疫组化染色、药物分析、临床实验等，可显著提高细胞学诊断阳性率，也可帮助判断细胞来源、分型，是目前病理诊断的首选制片方法，有利于对患者预后进行评估。在该方法的帮助下，绝大程度上提升了细胞采集工作的综合效率，可为病理性诊断的准确性以及科学性奠定有效基础。

近年来，针对细胞蜡块的制作方式已发现多种，且多数厂家也产出了细胞蜡块制作试剂盒，但目前关于分析不同固定方法对细胞蜡块制作效果影响的文献较少。相关研究显示，不同固定液会影响到细胞蜡块的效果，目前临床上使用较多的固定液有10%中性福尔马林、无水醇以及甲醇三种，均属于蛋白质变性剂，作为固定液使用具有良好的应用效果。甲醇还具有神经毒素，能够在患者的体内积蓄，甲醛是生物遗传诱变剂，部分学者认为甲醛还具有致癌作用。乙醇对人的损害，最重要的是中枢神经系统。它使神经系统从兴奋到高度的抑制，严重地破坏神经系统的正常功能。现使用三种固定液对同一个细胞学标本进行细胞蜡块制作，并综合评估不同固定液在细胞蜡块技术中的应用效果。研究结果显示10%中性福尔马林作为固定液时细胞蜡块的染色效果最好，且不会引起细胞变性等问题，肿瘤细胞与周围组织细胞之间存在明显的形态学差异，给临床医师的鉴别诊断提供了准确有效的数据支持。相对而言，无水乙醇与甲醇作为固定液的细胞蜡块HE染色效果较差，部分细胞发生变形而出现形态改变，但肿瘤细胞与周围组织细胞之间仍具有特异性的形态学差异[10]。在制作细胞蜡块过程中，使用10%中性福尔马林固定离心后，细胞不易凝结在一起，不利于包埋，在此时应尽可能将试管中液体取出，使用吸管将细胞沉淀物吸出，放于玻片上，使用滤纸将周围液体吸干，在细胞沉淀物上滴上几滴无水醇，细胞沉淀凝固成块，极易制作成细胞蜡块，无水醇与12%中性福尔马林两者固定较为迅速，细胞极易结成块，有助于细胞蜡块制作。

综上所述，10%中性福尔马林作为细胞蜡块的固定液具有更为显著的应用价值，适宜推荐使用。

参考文献：

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