神经药物对小鼠生育能力的影响

2022-04-14 07:12雷芊芊周明夏
湖北畜牧兽医 2022年4期
关键词:亲代交配雌性

雷芊芊,周明夏

(江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300)

药物安全性评价是指在实验室条件下,用试验系统对药物安全性作出评价,为临床研究提供理论依据,是评判药物能否进入临床研究的重要研究手段。生殖毒性试验是药物临床安全性评价经常使用的研究方式,按研究目的不同分为四类。Ⅰ段研究药物对动物精子活力、发情周期的影响;Ⅱ段研究药物对雌性动物妊娠及胚胎、胎仔发育的影响;Ⅲ段研究药物对动物遗传学的影响;Ⅳ段研究内容包括药物对妊娠动物、胚胎、胎仔发育情况及对动物群体遗传学表达规律的影响。本试验通过小鼠尾静脉注射神经药物,研究药物对小鼠的生育能力和早期胚胎发育的影响,旨在为临床研究提供动物试验资料。

1 材料与方法

1.1 试验动物的选择

1.1.1 品种的选择 根据药物生殖毒性研究技术指南,小鼠具有体型小、操作方便、易于饲养、性成熟快、生育能力强、怀孕时间短、产仔数多、对药物敏感等优点,被定义为人类的常用试验动物之一[1]。故使用小鼠作为试验动物。

1.1.2 数量的选择 在满足研究目的、科学标准,监管要求和动物福利的前提下,尽量减少使用动物。根据药物生殖毒性研究技术指南,每组中每种性别的小鼠不得少于5 只[2]。为确保每组数据有效性,防止偶然性,每组每种性别使用10 只小鼠。

1.1.3 日龄体重的选择 给药时雄性动物日龄为40~50 日龄;雌性为55~65 日龄。给药时雄性动物体重为27.2~34.4 g;雌性为24.7~28.6 g。

1.2 试验动物称重

试验动物给药前需称重1 次,称重后根据体重分组;分组后交配前1 周称重2 次;交配期间不称重;交配成功后,雌性小鼠在发现妊娠当天、妊娠3 d、妊娠6 d、妊娠9 d、妊娠13 d 各称重1 次,雄性小鼠交配成功后安乐死前称重[3]。

1.3 动物分组

根据动物体重,采用随机分组法,详见表1。

表1 试验动物分组情况

1.4 方法

1.4.1 动物标记识别

1)动物个体标记。分组前,用记号笔在小鼠尾部标记临时号。根据体重分组后雄性小鼠和雌性小鼠拥有一个惟一的动物编号,用耳打孔法辅助识别。耳打孔法具体方式:左耳打孔代表十位,右耳打孔代表个位,左右耳打孔中央圈为组别[4],详见图1。

图1 耳打孔法

2)笼卡标记。动物饲养笼盒上挂有标注动物信息的笼卡。

1.4.2 动物饲养 试验动物在无菌屏障环境中饲养,温度控制为20~24 ℃,湿度在30%~60%,光照12 h[5],动物在试验期间饮用纯净水,自由采食符合国家标准的小鼠生长繁育饲料。交配前饲养在装有垫料的饲养盒中,每盒最多饲养5 只同性别动物;交配期间,雌性小鼠放在雄性小鼠笼中饲养;交配成功后,为了防止妊娠动物在群养笼中相互咬伤而导致流产或其他事故,雌性小鼠单独饲养在单个笼子里[6]。

1.4.3 给药频率与方法

1)给药频率。每天给药1 次,雄性小鼠的给药时间为交配前28 d 开始至交配成功后停止;雌性小鼠的给药时间为交配前14 d 开始到妊娠6 d 停止[7]。

2)给药方法。对照组饲喂神经药物辅料,低剂量组、中剂量组、高剂量组注射不同浓度的某神经药物,使用仪器为一次性灭菌注射器和配套针头,采用尾静脉注射方式给药,10~20 s 完成。每只动物的给药量应根据体重进行调整,给药量需精确到0.01 mL。

1.4.4 动物观察

1)临床观察。每天2 次临床观察。2 次临床观察需间隔2 h 以上[8]。

2)给药局部观察。试验给药期间,每次给药前需对给药部位局部观察;给药结束后每周观察1 次。如动物给药局部出现异常反应,应连续观察至异常现象消失或安乐死当天。给药部位局部观察的主要内容是观察给药局部是否出现破溃、出血等症状[9]。

1.4.5 亲代动物指标检测

1)亲代雌性小鼠的妊娠检查。1~4 组孕鼠在妊娠13 d 解剖进行妊娠状态检查。将动物安乐死后,切除子宫,观察子宫状态,并对活胎、死胎及吸收胎进行计数。

2)亲代雄鼠精子计数和活力检查。交配成功后的雄性小鼠在24 h 内实施安乐死,解剖后取左侧附睾尾,吸取1 份精子悬液,滴至载玻片上,置于精子分析仪中进行精子计数,检查精子活力[10]。

3)亲代雄鼠精子形态检查。用一次性无菌胶头滴管吸取精液样本,在显微镜下观察每只动物200个精子中含有的畸形精子数。

2 结果与分析

2.1 体重

试验期间,对各组动物称量体重,未见异常,详见表2、表3。

表2 雄性小鼠平均体重 (单位:g)

表3 雌性小鼠体重 (单位:g)

2.2 临床观察

试验期间,各组试验动物均未出现不良反应。

2.3 妊娠情况

与对照组相比较,各试验组动物的妊娠率、活胎率、吸收胎率、死胎率未见异常,详见表4、表5。

表4 动物妊娠情况

表5 亲代雌性小鼠剖宫产数据统计

2.4 雄性小鼠精子活动度和精子计数

与对照组相比,各剂量组雄性小鼠精子活动度和精子计数未见明显异常,详见表6、表7。

表6 雄鼠精子活动度和精子计数

表7 雄鼠精子活动度和精子计数

2.5 亲代雄鼠精子形态学检查

通过统计学分析,对照组和各剂量组雄性小鼠精子畸形率未见明显异常,详见表8。

表8 雄性小鼠精子形态统计

2.6 亲代鼠生育能力统计

与对照组相比,各剂量组亲代雄性小鼠的交配率、生育率未见异常,各剂量组亲代雌性小鼠的交配率、受孕率、妊娠率未见异常,详见表9。

表9 小鼠生育能力统计

3 结论

随着科学与技术的进步,特殊人群的用药安全越来越受到重视。为了特殊人群的用药安全,在满足试验要求和动物福利的前提下,用试验小鼠拟代特殊人群开展试验。选用80 只试验鼠,对雌、雄性小鼠重复尾静脉注射某神经药物。通过观察重点检测指标,对试验结果进行分析发现神经药物对雌性小鼠妊娠情况、活胎率、吸收胎率、死胎率及雄性小鼠精子活力、精子计数和精子形态等均未产生影响。本研究实际为药物剂量、毒性的探索试验,观察药物对亲代小鼠生育能力及早期胚胎发育的影响,为该药物后续实验提供数据基础,为特殊人群安全用药提供参考。

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