LBC 联合BRAF V600E 检测诊断甲状腺乳头状癌的价值

郭勇

菏泽市立医院乳腺甲状腺外科，山东菏泽 274000

作为一种甲状腺恶性结节之中最为常见的病理类型， 甲状腺乳头状癌患者在早期并没有显著的不适症状，进行初诊时，无法发现其存在的异常情况[1]。目前在临床中对甲状腺疾病首选的诊断方式是常规超声检查，其具备敏感度较高、无创伤、无辐射以及简便的优点，但也存在特异度较低等缺点[2]。 而作为常规超声检查的重要补充， 液基细胞学 （liquidbased cytology，LBC）检查在对恶良性结节鉴别时，病理生理的基础便在解剖结构和空间分布之中微血管的差异[3-4]。而在B-Raf 原癌基因（B-Rafprotooncogene，BRAF）中，最为常见的突变便是第600 位密码子突变（V600E）。 同时BRAF V600E 基因突变同时也是甲状腺癌的一种常见基因突变类型， 在甲状腺乳头状癌中占据高达80%， 与甲状腺癌的侵袭程度具有直接关系[5-7]。现阶段，临床中对于甲状腺乳头状癌患者采取LBC 联合BRAF V600E 基因检测的研究较少。基于此，该文选取2017 年11 月—2019年11 月该院收治的98 例疑似甲状腺乳头状癌患者为研究对象，对LBC 联合BRAF V600E 基因检测在甲状腺乳头状癌诊断中的应用效果进行分析探究。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机抽取该院98 例疑似甲状腺乳头状癌患者，为研究对象均签署知情同意书。 患者年龄20~53 岁，平均（34.1±2.12）岁；男46 例，女52 例；病灶直径0.4~0.9 cm，平均（0.63±0.15）cm；体质量51~83 kg，平均（77.12±4.23）kg；病程1~5 个月，平均（2.28±0.15）个月。 该研究由该院医学伦理委员会审核批准开展。

纳入标准： ①患者存在甲状腺乳头状癌相关症状； ②实施的手术方式为甲状腺全切术以及甲状腺次全切术。

排除标准：①诊断回声显示，并不是低回声的结节；②结节的最大直径>1 cm；③结节中存在粗大钙化， 并且结节的成分不能显示； ④合并有多发性结节；⑤合并有严重的心肺功能损伤，无法使用超声造影检查；⑥术后病理诊断，发现其为单纯性或者结节性甲状腺肿大等非肿块病症。

1.2 方法

常规超声检查：使用彩色多普勒超声诊断仪，使用的探头频率设置为15 MHz，机械指数设定在0.08~0.14 之间。 其总增益应在88%左右，深度3 mm。 临床医师应引导患者完全暴露其颈部， 利用常规灰阶超声，对患者甲状腺区域进行扫描，具体应包含结界内部回声、结节内部、结节边界、患者血液循环、结节的形态和大小、结节周围组织的病变状况等内容。

在超声的引导之下，将细针传入到目标结节，随后将针芯拔出， 在结节内部沿不同方向使用穿刺针进行快速穿插， 数次后利用虹吸原理将甲状腺结节细胞进行吸取，在囊实性结节中穿取实性部位细胞，随后对穿刺标本立刻进行BRAF V600E 基因联合LBC 检测。 其中穿刺标本应使用95%无水乙醇湿法进行固定，采取苏木精-伊红染色法进行染色，随后在显微镜下进行细胞学诊断。

LBC 检查： 将30 mL 细胞保存液直接注入穿刺标本中，进行离心后去上清液，将胶质、黏液以及血细胞成分去除，使用自动液基细胞制片仪进行制片、封片以及HE 染色，在显微镜下实施细胞学诊断。

BRAF V600E 基因检测：将含有800 μl RNA later 保存液注入穿刺标本中， 并在PRC 管之中实施BRAF V600E 基因检测。在进行DNA 分离之后，将样本基因组DNA 进行提取，随后利用aRT-PCR，实现基因扩增，使用扩增阻滞突变系统法，以及BRAF V600E基因突变试剂盒，实施BRAF V600E 基因检测。

手术病理诊断：对于活检组织进行HE 染色，在低倍镜下对患者的内部回声以及病灶形态进行观察，使用高倍镜观察患者的细胞和组织具体情况。患者如果在低倍镜下出现砂砾体， 应使用高倍镜进行检查，将砂砾体的数量进行记录，并且观察患者结节组织的结构、数量、边界以及形态。

1.3 观察指标

将患者的手术病理诊断结果作为诊断的金标准，对患者采取常规超声和LBC 联合BRAF V600E基因检测的特异度、敏感度、准确度进行对比分析。其中准确度为诊断结果中真阴性和真阳性之和所占的比值； 敏感度为真阳性在真阳性与假阴性之和中所占的比值； 特异度则是真阴性在真阴性与假阳性例数中所占的比值。

1.4 统计方法

采用SPSS 20.0 统计学软件处理数据， 符合正态分布的计量资料用（±s）表示，采用t检验；计数资料用[n(%)]表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 手术病理诊断结果

98 例患者在进行手术病理诊断后，其中甲状腺乳头状癌为90 例，剩余8 例患者为其他疾病。 而常规超声诊断检查结果为甲状腺乳头状癌患者86 例，剩余12 例患者为其他疾病；LBC 联合BRAF V600E基因检测结果为甲状腺乳头状癌患者88 例， 剩余10 例为其他疾病。

2.2 两种诊断方法特异度与敏感性对比

经常规超声检查后， 特异度为25.00%（2/8）、敏感度为88.89%（80/90）、 准确度为83.67%（82/98）；经LBC 联合BRAF V600E 基因检测后， 特异度为87.50%（7/8）、 敏感度为96.67%（87/90）、 准确度为95.92%（94/98）。 相较常规超声检查，LBC 联合BRAF V600E 基因检测结果更为准确， 差异有统计学意义（χ2=4.063、4.063、8.018，P=0.044、0.044、0.005）。见表1、表2。

表1 常规超声检查的特异度与敏感性

表2 LBC 联合BRAF V600E 基因检测的特异度与敏感性

3 讨论

近些年， 对甲状腺结节患者进行超声引导下行细针穿刺细胞学检查样本实施BRAF V600E 检测进行了大量研究，但研究结果却具有较为显著的差异。临床研究文献可知， 采取BRAF V600E 基因突变检测能够有效提升对甲状腺结节诊断的准确度， 且能够在术前对病危病例进行相应筛查[8]。在对甲状腺乳头状癌患者检测时，研究文献结果显示，癌灶形态以及数量存在差异时， 中央区淋巴结转移和BRAF V600E 基因并无明显的相关性， 表示采取BRAF V600E 基因突变状态对甲状腺乳头状癌患者临床病例特征影响并不明确[9]。

作为一种操作简便的诊断方式， 常规超声对于甲状腺乳头状癌的诊断敏感性较低， 并且较易受到患者病灶边界、操作者水平、血流信号以及钙化直径等因素的影响[10]。采取LBC 检测，则是将穿刺标本冲洗到细胞保存液之中，在进行多次的振荡离心后，将标本中的胶质、 血细胞以及细胞碎片等相关干扰成分取出， 利用液基自动制片设备进行制片， 在玻片13 mm 直径范围内黏附浓缩细胞和诊断成分， 进一步保障诊断的准确性[11-13]。 但需要注意的是，LBC 在制片时，存在离心和振荡过程，可能会导致患者细胞簇分散，产生大量的单个细胞。并且该过程对细胞质也会产生影响，增大核质比例，产生大量裸核，对准确度造成影响[14-16]。 因此单独使用LBC 存在一定的问题。 而在甲状腺乳头状癌中BRAF V600E 基因检测突变较为常见，BRAF V600E 基因可以将细胞外刺激信号转导到细胞中，从而引起一系列的细胞反应，例如对细胞分化、死亡、增殖、转移等功能的调控[17]。 所以临床中，常会选择联合两种方式实施检测，提高检测准确度。

该研究结果可知，LBC 联合BRAF V600E 基因检测后，特异度为87.50%（7/8）、敏感度为96.67%（87/90）、准确度为95.92%（94/98），优于单一检测结果。黄建新等[14]学者在相关研究中得出，联合检测的敏感度为97.37%、特异度为100.00%明显优于单一检测，与该文所得结果相近。 因此，联合检测可以显著提高甲状腺乳头状癌患者的诊断准确性， 避免错过最佳时间，弥补单纯常规超声的诊断不足[18]。

综上所述， 对于甲状腺乳头状癌患者采取LBC联合BRAF V600E 基因检测鉴别价值高， 能够提高甲状腺乳头状癌诊断的准确率，值得推广。